ICS 65.040.10 B 40 曲 靖 市 地 方 标 准 DB 5303/T 6.4—2013 滇陆猪综合标准 第 4 部分：滇陆猪人工授精操作规程 2013 - 06 - 01 发布 曲靖市市场监督管理局 2013 - 09 - 01 实施 发 布 DB5303/T 6.4—2013 前 言 DB5303/T 6《滇陆猪综合标准》分为5个部分： ——第1部分：滇陆猪猪场选址及建设规程； ——第2部分：滇陆猪核心群、扩繁群选育标准； ——第3部分：滇陆猪饲养管理规程； ——第4部分：滇陆猪人工授精操作规程； ——第5部分：滇陆猪兽医防治规程。 本部分为DB5303/T 6 的第4部分。 本部分按照GB/T 1.1-2000《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规程》的规定编写。 本部分由云南省畜牧兽医科学院、陆良县滇陆猪研究所提出。 本部分由曲靖市市场监督管理局归口。 本部分起草单位：云南省畜牧兽医科学院、陆良县畜牧兽医局、陆良县滇陆猪研究所和陆良县种猪 试验场。 本部分起草人：陈吉红、张桂生、魏斌、卢建富、孙林坤、高肖志、郭建常、孙剑敏、韩学能、韩 贵平。 I DB5303/T 6.4—2013 滇陆猪综合标准 第 4 部分：滇陆猪人工授精操作规程 1 范围 DB5303/T 6的本部分规定了滇陆猪人工授精技术的实验室与采精室建设、种公猪的调教与采精、稀 释液的配制、精液的稀释、精液的品质检查、精液的保存和运输及母猪的输精技术操作规程。 本部分适用于滇陆猪人工授精技术操作。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于文件。 2.1 滇陆猪 利用乌金猪、太湖猪两个中国优良地方猪种和长白猪、大约克两个国外著名猪种为素材杂交选育而 成的新品种，具有产仔多、肉质好、生长速度较快、母性强、耐粗抗逆、瘦肉率高等优良特性。 2.2 供精公猪 必须达到供精种公猪管理规范要求及精液质量评定标准的滇陆公猪。 2.3 原精液 具有种用价值，体型外貌和生产性能符合种用要求、三代系谱资料齐全、体质健康的滇陆种公猪采 集后未经稀释处理的精液。 2.4 精子活力 在37℃环境下直线前进运动精子占总精子数的百分率。 2.5 直线前进运动精子数 精液中呈直线前进运动精子的总数。 2.6 精子畸形率 1 DB5303/T 6.4—2013 畸形精子占总精子数的百分率。 3 实验室技术操作规程 3.1 保证每一瓶精液的活力不低于 0.7, 72 小时之内保存活率不受影响。 3.2 实验室要求整洁、干净、卫生，每周彻底清洁一次。 3.3 实验室分成干燥区和潮湿区，干燥区用于稀释液的配制和精液的检查、稀释、分装，潮湿区安放 水槽，用于清洗器械和制备双蒸水。 3.4 非实验室工作人员在正常情况下不准进入实验室，采精员也不准进入实验室。 3.5 所有仪器设备使用前要仔细阅读说明书后，由专人按操作规程使用和维护保养；特别是高压蒸气 灭菌器、双蒸馏器使用时要注意人身安全。 3.6 各种电器设备按其要求选择适应插座，除冰箱、精液保存箱、恒温培养箱等外，电器要求人走断 电，干燥箱无人时设定温度不高于 100 ℃。 3.7 物品、器皿的清洗、消毒方法：所有器皿以洗洁精或洗衣粉清洗干净，再以蒸馏水漂洗，60 ℃ 干燥（玻璃用品干燥温度可高于 100 ℃）后，以锡纸包扎器皿开口，玻璃器皿 180℃、1 小时进行干热 灭菌，非耐热器皿、用具以高压灭菌器 121 ℃、20 分钟湿热灭菌。 3.8 稀释液的配制、精液检查、稀释、分装严格按照人工授精操作规程进行。 3.9 实验室仪器设备保持清洁卫生：实验室内使用的仪器设备，如显微镜、干燥箱、水浴锅、17 ℃精 液保存箱、冰箱、37 ℃恒温板、电子天平等，必须保持清洁卫生，显微镜镜头（目镜和物镜），每 2 周用二甲苯浸泡一次，保持清洁。 3.10 实验室一般要求与采精室相邻，以方便操作，墙上设一高 40 cm×宽 60 cm 窗口与采精室相通， 窗口二侧设透明活动窗，窗内温度控制在 20 ℃。 采精室与实验室之间的传递口的两测窗只有在传递 物品时才能按先后顺序开启使用。 3.11 实验室地板、实验台保持干净清洁。 3.12 下班离开实验室前必须检查电源、水龙头、门、窗是否关闭好，做到万无一失方可离开实验室， 确保安全。 3.13 防火防盗，注意安全。 4 采精室管理规程 2 2 4.1 采精室面积大约 10 m ～15 m ，地面要求平整、防滑、清洁。 4.2 采精室中间放采精架，采精架的后方地面放置防滑垫（或麻袋）。左右两边用直径 10 cm 钢管隔 开作为安全区，钢管高 0.75 m，距墙壁 0.6 m，间隔 0.3 m。 4.3 每次采精后须清洗地面，特别清除精液胶体，采精室内安装紫外线灯，下班时开启，通宵照射消 毒。 5 疫病控制 5.1 疫病检测 定期检测猪瘟、口蹄疫、乙型脑炎、伪狂犬病、猪繁殖与呼吸道综合症、细小病毒病等传染性疾病， 及时淘汰隐形带毒（菌）的种公猪。 5.2 免疫注射 2 DB5303/T 6.4—2013 根据当地传染病流行状况，制定相应的免疫程序，认真搞好免疫注射。 5.3 定期驱虫 每年春秋各1次，共2次。 6 种公猪的调教规程 6.1 后备公猪 7 月龄开始调教，每天一次，每次 15 分钟～20 分钟。调教成功后连续采精 2～3 次，隔 天采精，以形成条件反射。 6.2 对种公猪进行调教时做到胆大心细、动作轻柔、环境安静，禁止粗暴对待种公猪，避免形成不良 的条件反射。 6.3 用发情母猪尿液，洒在台畜背部，刺激公猪性欲，促使其爬跨。 6.4 让新公猪经观察其它公猪的爬跨动作，有利于调教。 6.5 让调教公猪爬跨发情母猪，以刺激公猪的性欲，待公猪阴茎充分勃起，性欲十分旺盛时将母猪赶 走，引导公猪爬跨台畜。 6.6 经过上述方法训练调教仍不能爬跨的，则放弃对该公猪的调教。 6.7 达到调教日龄的公猪如遇长距离运输、生病则不能调教，待身体恢复后才可以调教。 7 采精的操作规程 7.1 采精员一手带双层手套，另一手持 37 ℃保温杯(内装 1 次性食品袋)用于收集精液。 7.2 饲养员将待采精的公猪赶至采精栏，用 0.1%高锰酸钾溶液清洗其腹部和包皮，再用温水（夏天用 自来水）清洗干净，避免药物残留对精子的伤害。 7.3 采精员挤出公猪包皮积尿，按摩公猪包皮部，刺激其爬跨假台畜。 7.4 公猪爬跨假台畜并逐步伸出阴茎，脱去外层手套，将公猪阴茎龟头导入空拳。 7.5 用手（大拇指与龟头相反方向）紧握伸出的公猪阴茎螺旋状龟头，顺其向前冲力将阴茎的“S”状 弯曲拉直，握紧阴茎龟头防止其旋转，公猪即可射精。 7.6 用四层沙布过滤收集精液于保温杯内的一次性食品袋内，最初射出的少量精液含有尿液精子很少， 可以不必接取，公猪分 2—3 个阶段射精，接取原精液须等到公猪射精完毕，历时达 5 分钟—7 分钟。 7.7 采精员注意安全，一旦公猪出现攻击行为，采精员立刻逃至安全角。 7.8 下班之前彻底清洗采精栏。 7.9 采精期间不准欧打公猪，防止出现性抑制。 7.10 采精频率：成年公猪每周 2 次，青年公猪（1 岁左右）每周 1 次。最好固定每头公猪的采精频率。 8 稀释液的配制和精液的稀释操作规程 8.1 稀释液的配制操作规程 8.1.1 配制稀释液的药品要求选用分析纯试剂，对含有结晶水的试剂要按摩尔浓度进行换算（如含水 葡萄糖和无水葡萄糖）； 8.1.2 按稀释液配方，用称量纸、电子天平准确称量药品； 8.1.3 按 1 000 mL、2 000 mL 剂量称量稀释粉，置于密封袋中； 8.1.4 使用前将称量好的稀释粉溶于定量的双蒸水中，用磁力搅拌器搅拌助其溶解； 3 DB5303/T 6.4—2013 8.1.5 用滤纸过滤，以尽可能除去杂质； 8.1.6 用 1LN 稀盐酸或 1LN 氢氧化钠调整 BTS 稀释液的 pH 值为 7.2(6.8—7.4)左右,渗透压为 330 mOsm； 稀释液配好，及时贴上标签，标明品名、配制日期和时间、经手人等； 8.1.7 要认真检查已配制好的稀释液成品，发现问题及时纠正； 8.1.8 液态状稀释液冰箱 4 ℃保存，不超过 24 小时，超过有效贮存期的变质稀释液要废弃。 8.2 精液的稀释操作规程 8.2.1 精液采集后尽快稀释，原精液贮存不超过 30 分钟。 8.2.2 稀释液与精液要求等温，两者温差不超过 1 ℃，以精液温度为标准来调节稀释液的温度，绝不 能反过来操作。 8.2.3 稀释时，尽量减少精液的转移，将稀释液沿杯(瓶)壁缓慢加入到精液中，然后轻轻摇动或用消 毒玻璃棒搅拌，使之混合均匀。如作高倍稀释时，先进行低倍稀释（1：1-2），稍待片刻后再将余下的 稀释液沿壁缓慢加入，以防造成“稀释打击”。 8.2.4 稀释倍数的确定：活率≥0.7 的精液，按每个输精剂量含 40 亿个总精子，输精量为 80 mL～90 mL 确定稀释倍数。例如：某头公猪一次采精量是 200 mL，活力为 0.8，密度为 2 亿/毫升，要求每个输精 剂量是含 40 亿精子，输精量为 80 mL，则总精子数为 200mL×2 亿/mL=400 亿，输精头份为 400 亿÷40 亿=10 份，加入稀释液的量为 10×80 mL-200 mL=600 ml； 8.2.5 稀释后要求静置片刻再作一次精子活力检查，如果稀释前后活力一样，即可进行分装与保存， 如果活力下降，说明稀释液的配制或稀释操作有问题，不宜使用，并查明原因加以改进。 9 精液的品质检查操作规程 9.1 精液量 以电子天平称量精液，按每克1毫升计，避免以量筒等转移精液盛放容器的方法而造成精液的污染。 9.2 颜色 正常的精液是乳白或浅灰白色，精子密度越高，色泽愈浓，其透明度愈低。如带有绿色或黄色是混 有脓液或尿液，若带有淡红色或红褐色是含有血液。这样的精液舍弃不用，并会同兽医查找原因。 9.3 气味 略带腥味，如有异常气味，则废弃不用。 9.4 pH 值 用pH试纸测定pH值，用滴管吸取一滴精液滴在试纸上，1分钟后与标准比色版对比，确定pH值。也 可用pH计测量（pH计使用见说明书）。 9.5 精子活率检查 在37 ℃环境温度、400倍显微镜下对精子活率进行检查，活率是指呈直线运动的精子百分率，在显 微镜下观察精子活率，按0.1～1.0 的十级评分法进行，鲜精活率要求不低于0.7。 9.6 精子密度 4 DB5303/T 6.4—2013 指每毫升精液中所含的精子数，是确定稀释倍数的重要指标。要求用血细胞计数板进行计数或精液 密度仪测定。有经验的技术人员可以用目测法，但每一个月必须对精子进行一次密度测定。 9.7 精子畸形率 必须对新公猪的最初几次射精进行形态检查，以后每