ICS65.120 B46 中华人民共和国国家标准 GB/T18397—2014 代替GB/T18397—2001 预混合饲料中泛酸的测定 高效液相色谱法 Determinationofpantothenicacidinpremix— Highperformanceliquidchromatography 2014-07-08发布 2015-01-10实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布中华人民共和国 国家标准 预混合饲料中泛酸的测定 高效液相色谱法 GB/T18397—2014 * 中国标准出版社出版发行 北京市朝阳区和平里西街甲2号(100029) 北京市西城区三里河北街16号(100045) 网址:www.gb168.cn 服务热线:400-168-0010 010-68522006 2014年11月第一版 * 书号:155066·1-50142 版权专有 侵权必究 前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准代替GB/T18397—2001《复合预混合饲料中泛酸的测定 高效液相色谱法》。 本标准与GB/T18397—2001相比主要变化如下: ———标准名称由《复合预混合饲料中泛酸的测定 高效液相色谱法》改为《预混合饲料中泛酸的测 定 高效液相色谱法》; ———范围中删除了“也适用于浓缩饲料中泛酸的测定”;将“测量范围为每千克样品中含泛酸在 50mg以上”修改为“本标准测定泛酸的检出限为5mg/kg,定量限为20mg/kg”; ———样品提取剂不加EDTA,直接采用流动相进行提取; ———流动相用乙腈与0.05%磷酸溶液的混合液代替磷酸缓冲液; ———结果计算中,用外标法多点校正或单点校正代替原来的“单点校正”。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)归口。 本标准起草单位:江西省兽药饲料监察所、通威股份有限公司。 本标准主要起草人:符金华、杨发树、文虹、饶辉、刘耀敏、张凤枰、樊晶、赵艳。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为: ———GB/T18397—2001。 ⅠGB/T18397—2014 预混合饲料中泛酸的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了用高效液相色谱仪测定预混合饲料中泛酸含量的方法。 本标准适用于复合预混合饲料、维生素预混合饲料中泛酸的测定。 本标准测定泛酸的检出限为5mg/kg,定量限为20mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1 饲料 采样 3 原理 试样中的泛酸经乙腈磷酸水溶液提取,离心,过滤,用C18色谱柱分离,紫外检测器检测,外标法 定量。 4 试剂和溶液 除特殊注明外,本标准所使用试剂均为分析纯,水符合GB/T6682中规定的二级用水。 4.1 磷酸:含量≥85%。 4.2 乙腈:色谱纯。 4.3 0.05%磷酸溶液:将0.5mL磷酸(4.1)加入容量瓶中,并定容至1000mL。 4.4 D-泛酸(或D-泛酸钙)标准溶液。 4.4.1 标准贮备液:准确称取纯度大于99.0%的D-泛酸或D-泛酸钙标准纯品适量于100mL容量瓶 中,用流动相溶解,定容,使该标准贮备液的浓度含泛酸为1000μg/mL。此标准溶液在4℃可保存三 个月。泛酸浓度=D-泛酸钙的浓度×0.920。 4.4.2 标准工作溶液:分别准确吸取标准贮备液(4.4.1)0.5mL,1.0mL,2.0mL,5.0mL,10.0mL于 100mL容量瓶中,用流动相定容至刻度,得到浓度分别为5.0μg/mL,10.0μg/mL,20.0μg/mL, 50.0μg/mL,100.0μg/mL的泛酸标准工作液。现用现配。 5 仪器和设备 5.1 分析天平:感量0.0001g。 5.2 离心机:转速3000r/min。 5.3 摇床。 1GB/T18397—2014 5.4 超声波清洗器。 5.5 样品筛:孔径0.28mm。 5.6 高效液相色谱仪,配有紫外检测器(或二极管矩阵检测器)。 6 试样的制备 按GB/T14699.1规定,取有代表性饲料样品至少500g,四分法缩减至少100g,磨碎,过0.28mm 孔径样品筛,混匀装入密闭容器中,避光低温保存备用。 7 分析步骤 7.1 提取 称取维生素预混合饲料0.25g~0.5g,复合预混合饲料1g~2g,精确至0.0001g,置于150mL 具塞锥形瓶中。准确加入50mL流动相,于超声波水浴提取15min,或置于摇床上振摇提取20min,静 置。取适量溶液3000r/min离心5min,离心后上清液经过0.45μm滤膜过滤,滤液供高效液相色谱 仪分析用。 7.2 测定 7.2.1 液相色谱参考条件 色谱柱:C18柱,柱长150mm,内径4.6mm,粒度5μm,或具有相同性能的色谱柱; 流动相:将50mL的乙腈加入到950mL磷酸溶液(4.3)中混匀; 流速:1.0mL/min; 进样量:10μL; 柱温:30℃; 检测器:紫外检测器(或二极管矩阵检测器PDA)使用波长200nm。 7.2.2 液相色谱测定 分别取适量的标准工作液(4.4.2)和试样溶液(7.1),按7.2.1列出的条件进行液相色谱分析测定。 按照保留时间进行定性,以标准工作液作单点或多点校准,并用色谱峰面积定量。待测样液中泛酸的响 应值应在标准曲线范围内,超过线性范围则应稀释后再进样分析。泛酸色谱图参见附录A。 8 结果计算与表示 8.1 结果计算 试样中泛酸的含量(X),以质量分数表示,按式(1)计算。 X=c×V×n m……………………………(1) 式中: X———试样中泛酸的含量,单位为毫克每千克(mg/kg); c———试样溶液中泛酸的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL); V———提取时加入的流动相总体积,单位为毫升(mL); m———试样质量,单位为克(g); 2GB/T18397—2014 n———稀释倍数。 8.2 结果表示 测定结果用平行测定的算术平均值表示,计算结果保留三位有效数字。 9 重复性 在重复性条件下获得的两次独立测试结果的相对偏差不大于10%。GB/T18397—2014 GB/T18397—2014 附 录 A (资料性附录) 泛酸色谱图 泛酸色谱图见图A.1。 图A.1 20μg/mL泛酸色谱图 4102—79381T/BG 版权专有 侵权必究 * 书号:155066·1-50142