书 书 书犐犆犛 ６５ ． １２０ 犅 ４６ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ２１５１７ — ２００８ 饲料添加剂 　 叶黄素 犉犲犲犱犪犱犱犻狋犻狏犲 — 犔狌狋犲犻狀 ２００８  ０３  ０３ 发布 ２００８  ０５  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准的附录 Ｂ 为规范性附录 ， 附录 Ａ 为资料性附录 。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口 。 本标准起草单位 ： 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 、 国家饲料质量监督检验中心 （ 北京 ）、 成都枫澜科技有限公司 、 武汉新华扬生物有限责任公司 。 本标准主要起草人 ： 赵小阳 、 田河山 、 孙鸣 、 李巍 、 詹志春 、 陶正国 、 马东霞 、 王彤 、 杨文军 。 本标准首次发布 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ２１５１７ — ２００８ 饲料添加剂 　 叶黄素 １ 　 范围 本标准规定了饲料添加剂叶黄素产品的分类 、 要求 、 试验方法 、 检验规则及标签 、 包装 、 贮存 、 运输 。 本标准适用于以植物万寿菊中脂溶性提取物为原料 ， 经皂化后 ， 制成水剂或采用淀粉 、 玉米芯粉 、 白 炭黑等辅料 ， 有效成分主要是叶黄素和它的同分异构体玉米黄质 ， 也有少量的其他类胡萝卜素和蜡质 ， 在饲料工业中作为着色剂类饲料添加剂 。 分子式 ： Ｃ ４０ Ｈ ５６ Ｏ ２ 相对分子质量 ： ５６８．８８ （ ２００１ 年国际相对原子质量 ） 结构式 ： ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。 凡是注日期的引用文件 ， 其随后所有 的修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本标准 ， 然而 ， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本标准 。 ＧＢ ／ Ｔ６０３ 　 化学试剂 　 试验方法中所用制剂及制品的制备 （ ＧＢ ／ Ｔ６０３ — ２００２ ， ＩＳＯ６３５３１ ： １９８２ ， ＮＥＱ ） ＧＢ ／ Ｔ６０６ 　 化学试剂 　 水分测定通用方法 　 卡尔 · 费休法 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 　 分析实验室用水规格和试验方法 （ ＧＢ ／ Ｔ６６８２ — １９９２ ， ｎｅｑＩＳＯ３６９６ ： １９８７ ） ＧＢ１０６４８ 　 饲料标签 ＧＢ ／ Ｔ１３０７９ 　 饲料中总砷的测定 ＧＢ ／ Ｔ１３０８０ 　 饲料中铅的测定 　 原子吸收光谱法 ３ 　 分类 ３ ． １ 　 产品按标示量的不同可分为 ： １．５％ 、 １．６％ 、 ２．０％ 三种 。 ３ ． ２ 　 根据合同要求确定 。 ４ 　 要求 ４ ． １ 　 性状 本品为自由流动的橘黄色细微粉末或橘黄色液体 ， 易氧化 ， 不溶于水 ， 溶于乙醇 。 ４ ． ２ 　 技术指标 技术指标应符合表 １ 规定 。 １ 犌犅 ／ 犜 ２１５１７ — ２００８ 表 １ 　 技术指标 项 　　 目指 　　 标 粉状 液体 含量 （ 以 Ｃ ４０ Ｈ ５６ Ｏ ２ 计 ）（ 占标示量的百分比 ）／ ％ ≥ ９０ ≥ ９０ 砷 ／（ ｍｇ ／ ｋｇ ） ≤ ３．０ ≤ ３．０ 铅 ／（ ｍｇ ／ ｋｇ ） ≤ １０．０ ≤ １０．０ 水分 ／ ％ ≤ ８．０ — 粒度 （ ０．８４ｍｍ 孔径标准筛 ） １００％ 通过 — ｐＨ 值 — ５．０ ～ ８．０ ５ 　 试验方法 除特殊说明外 ， 所用试剂均为分析纯 ， 水为蒸馏水 ， 色谱用水符合 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 中一级用水规定 ， 标 准溶液的制备应符合 ＧＢ ／ Ｔ６０３ 。 ５ ． １ 　 试剂和溶液 ５ ． １ ． １ 　 正己烷 ： 色谱纯 。 ５ ． １ ． ２ 　 乙酸乙酯 ： 色谱纯 。 ５ ． １ ． ３ 　 正己烷 。 ５ ． １ ． ４ 　 无水乙醇 。 ５ ． １ ． ５ 　 丙酮 。 ５ ． １ ． ６ 　 甲苯 。 ５ ． １ ． ７ 　 亚硝酸钠 。 ５ ． １ ． ８ 　 硫酸 。 ５ ． １ ． ９ 　 亚硝酸钠溶液 （ ５０ｇ ／ Ｌ ）。 ５ ． １ ． １０ 　 硫酸溶液 （ ０．５ｍｏｌ ／ Ｌ ）： 吸取硫酸 （ ５．１．８ ） １．５ｍＬ 缓缓注入 １００ｍＬ 水中 ， 冷却 ， 摇匀 。 ５ ． １ ． １１ 　 提取剂 ： 正己烷 ＋ 乙醇 ＋ 丙酮 ＋ 甲苯 ＝１０＋６＋７＋７ （ 体积比 ）。 ５ ． ２ 　 仪器和设备 实验室常用设备及以下设备 。 ５ ． ２ ． １ 　 超声波水浴 。 ５ ． ２ ． ２ 　 超纯水装置 。 ５ ． ２ ． ３ 　 紫外分光光度计 。 ５ ． ２ ． ４ 　 石英比色皿 （ １ｃｍ ）。 ５ ． ２ ． ５ 　 高效液相色谱仪 ： 带紫外可调波长检测器 （ 或二极管矩阵检测器 ）。 ５ ． ２ ． ６ 　 原子吸收分光光度计 。 ５ ． ３ 　 鉴别试验 ５ ． ３ ． １ 　 方法一 样品的丙酮溶液在连续加入亚硝酸钠溶液 （ ５．１．９ ） 和硫酸溶液 （ ５．１．１０ ） 后颜色消失 。 ５ ． ３ ． ２ 　 方法二 取试样溶液 （ ５．４．２．１ ）， 用分光光度计测定 ， 以 １ｃｍ 石英比色皿在 ４２０ｎｍ ～ ４８０ｎｍ 波长范围内测 定试样溶液的吸收光谱 ， 应在 ４４５ｎｍ±１ｎｍ 、 ４７３ｎｍ±１ｎｍ 的波长处有最大吸收峰 。 ５ ． ３ ． ３ 　 方法三 （ 仲裁法 ） ５ ． ３ ． ３ ． １ 　 原理 叶黄素含量以总类胡萝卜素含量表示 ， 试样中总类胡萝卜素经混合溶剂提取后 ， 注入正相色谱柱 ２ 犌犅 ／ 犜 ２１５１７ — ２００８ 上 ， 用流动相洗脱 ， 分离出叶黄素和玉米黄质 ， 其色谱峰的分离度为 ３．０６ ～ ３．０９ ， 叶黄素含量应在 ７０％ 以上 ， 玉米黄质含量在 １０％ 以上 ， 并通过峰面积比例测知其相对含量 。 ５ ． ３ ． ３ ． ２ 　 试液的制备 根据产品含量 （ 参见附录 Ａ ）， 称取试样约 ０．１５ｇ ～ ０．２ｇ （ 精确至 ０．０００２ｇ ）， 置于 １００ｍＬ 棕色容 量瓶中 ， 加提取剂 （ ５．１．１１ ） 约 ８０ｍＬ ， 在超声波水浴中加热超声提取 ２０ｍｉｎ ， 冷却至室温 ， 用提取剂 （ ５．１．１１ ） 定容至刻度 ， 混匀 ， 过滤 ， 用移液管准确移取 １ｍＬ 滤液到 １０ｍＬ 容量瓶中 ， 用氮气吹干 ， 用流 动相稀释至刻度 ， 混匀 ， 溶液过 ０．４５ μ ｍ 滤膜 ， 供高效液相色谱仪分析 。 ５ ． ３ ． ３ ． ３ 　 色谱条件 固定相 ： 硅胶柱 ， 内径 ４．６ｍｍ ， 长 ２５０ｍｍ ， 粒度 ３ μ ｍ 。 流动相 ： 正己烷 ＋ 乙酸乙脂 ＝７０＋３０ （ 体积比 ）， 超声脱气 。 流速 ： １．５ｍＬ ／ ｍｉｎ 。 检测器 ： 紫外可调波长检测器 （ 或二极管矩阵检测器 ）， 检测波长 ４４５ｎｍ 或 ４７３ｎｍ 。 进样量 ： ２０ μ Ｌ 。 ５ ． ３ ． ３ ． ４ 　 试样测定 将试样分析液 （ ５．３．３．２ ）， 按上述色谱条件进行进样分析 ， 得到叶黄素和玉米黄质 ， 色谱峰见 图 Ｂ．１ 。 ５ ． ３ ． ３ ． ５ 　 结果计算 叶黄素 （ ％ ） ＝ 总类胡萝卜素量 × 叶黄素的峰面积 （ ％ ）………………（ １ ） 玉米黄质 （ ％ ） ＝ 总类胡萝卜素量 × 玉米黄质的峰面积 （ ％ ）………………（ ２ ） ５ ． ４ 　 叶黄素 （ 以总类胡萝卜素计 ） 含量的测定 ５ ． ４ ． １ 　 原理 总类胡萝卜素在波长 ４４５ｎｍ±１ｎｍ 处有最大吸收 ， 可根据该波长处测定吸收度和标准百分吸光 系数 （ 犈 １％ １ｃｍ ） 计算其含量 。 ５ ． ４ ． ２ 　 分析步骤 ５ ． ４ ． ２ ． １ 　 试液的制备 根据产品含量 （ 参见附录 Ａ ）， 称取试样约 ０．１５ｇ ～ ０．２ｇ （ 精确至 ０．０００２ｇ ）， 置于 １００ｍＬ 棕色容 量瓶中 ， 加约 ８０ｍＬ 无水乙醇 （ ５．１．４ ）， 在超声波水浴中加热超声提取 ２０ｍｉｎ ， 冷却至室温 ， 用无水乙醇 （ ５．１．４ ） 定容至刻度 ， 混匀 ， 过滤 ， 用移液管准确移取 １ｍＬ 滤液到 １０ｍＬ 容量瓶中 ， 用无水乙醇 （ ５．１．４ ） 稀释至刻度 ， 混匀 。 ５ ． ４ ． ２ ． ２ 　 试样测定 将试样分析液 （ ５．４．２．１ ） 置于 １ｃｍ 石英池中 ， 用紫外分光光度计 ， 在波长 ４４５ｎｍ±１ｎｍ 处测定吸 收度 犃 ， 以无水乙醇 （ ５．１．４ ） 为空白对照 。 ５ ． ４ ． ２ ． ３ 　 计算和结果的表示 试样中叶黄素 （ Ｃ ４０ Ｈ ５６ Ｏ ２ ）（ 以总类胡萝卜素计 ） 含量 犡 以质量分数 （ ％ ） 表示 ， 按式 （ ３ ） 计算 ： 犡 ＝ 犃 × １０００ 犿 × ２５５０ …………………………（ ３ ） 　　 式中 ： 犃 ——— 试料 （ ５．４．２．１ ） 吸收度 ； １０００ ——— 试料 （ ５．４．２．１ ） 稀释倍数 ； 犿 ——— 试料质量 ， 单位为克 （ ｇ ）； ２５５０ ——— 总类胡萝卜素百分吸光系数 （ 犈 １％ １ｃｍ ＝２５５０ ）。 平行测定结果用算术平均值表示 ， 保留三位有效数字 。 ５ ． ４ ． ３ 　 允许差 同一分析者对