书 书 书犐犆犛 ６５ ． １６０ 犡 ８７ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ２３２２４ — ２００８ 烟草品种抗病性鉴定 犐犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀狅犳犮狌犾狋犻狏犪狉狉犲狊犻狊狋犪狀犮犲狋狅狋狅犫犪犮犮狅犱犻狊犲犪狊犲 ２００８  １２  ３１ 发布 ２００９  ０６  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准由国家烟草专卖局提出 。 本标准由全国烟草标准化技术委员会 （ ＳＡＣ ／ ＴＣ１４４ ） 归口 。 本标准起草单位 ： 中国烟草总公司青州烟草研究所 。 本标准主要起草人 ： 孔凡玉 、 王凤龙 、 张成省 、 钱玉梅 、 王静 、 陈德鑫 、 申莉莉 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ２３２２４ — ２００８ 烟草品种抗病性鉴定 １ 　 范围 本标准规定了烟草品种对由病原真菌 、 细菌 、 病毒和根结线虫等引起的主要病害的抗病性鉴定及抗 性评价方法 。 本标准适用于各类型烟草品种的抗病性鉴定 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。 凡是注日期的引用文件 ， 其随后所有 的修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本标准 ， 然而 ， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本标准 。 ＧＢ ／ Ｔ２３２２２ 　 烟草病虫害分级及调查方法 ３ 　 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准 。 ３ ． １ 致病性分化 　 狏犪狉犻犪狋犻狅狀狅犳狆犪狋犺狅犵犲狀犻犮犻狋狔 病原物由于突变 、 杂交 、 适应性变异 、 不同孢子细胞质的异质性等致使生理小种改变 ， 导致致病性 差异 。 ３ ． ２ 人工接种鉴定 　 犪狉狋犻犳犻犮犻犪犾犻狀狅犮狌犾犪狋犻狅狀犳狅狉犻犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀 用人工繁殖或收集的病原物 ， 按一定量接种 ， 创造发病条件 ， 根据接种对象发病程度确定品种抗病 性强弱 。 ３ ． ３ 对照品种 　 犮狅狀狋狉狅犾犮狌犾狋犻狏犪狉 为了检验试验的可靠性 ， 在品种鉴定时附加的抗病品种和感病品种 。 ４ 　 品种抗病性鉴定 ４ ． １ 　 黑胫病 ４ ． １ ． １ 　 田间病圃鉴定 ４ ． １ ． １ ． １ 　 鉴定方法 选择排灌方便 ， 肥力水平中等 ， 连年发病较重的烟田作鉴定圃 ， 病圃应明确病原生理小种类别 。 每 个品种种植 １ 行 ， 每行 ２０ 株以上 ， 至少 ３ 次重复 ， 随机排列 ， 每重复设抗病品种 “ 革新三号 ”、 中抗品种 “ 金星 ６００７ ” 和感病品种 “ 小黄金 １０２５ ” 各 １ 行为对照 。 另设当地种植的抗 、 中 、 感品种作为辅助对照 。 参鉴烟草品种在全生育期内不应使用杀菌剂 ， 杀虫剂的使用根据病圃内害虫发生种类和程度而定 。 人工接种鉴定 ， 接种体选用当地优势生理小种或根据试验需要选取菌株 。 烟草移至大田成活后 （ １０ｄ ～ ２０ｄ ） 用菌谷接种 ， 每株接种量 ４ｇ 。 接种后若天气干旱应灌水 ， 以使田间土壤含水量处于饱和 状态 。 １ 犌犅 ／ 犜 ２３２２４ — ２００８ 菌谷制作方法 ： 将谷子煮至约一半谷粒开花 ， 捞出 ， 装入三角瓶 ， 高压灭菌 １ｈ 。 将已培养好的黑胫 病菌种 ， 接种到灭菌后冷却的谷子上 ， 然后置于 ２８℃ ～ ３０℃ 下培养 １５ｄ ～ ２０ｄ 即成 。 ４ ． １ ． １ ． ２ 　 分级及调查方法 病害严重度分级应符合 ＧＢ ／ Ｔ２３２２２ 的规定 。 调查时间 ： 于发病初期 、 盛期和末期各调查 １ 次 ， 每次均应调查各品种全部植株 。 ４ ． １ ． ２ 　 室内接种鉴定 ４ ． １ ． ２ ． １ 　 鉴定方法 烟苗长至 ５ 片 ～ ６ 片真叶时 ， 移栽至直径大于 １０ｃｍ 的花盆 ， 每盆 ２ 株 。 每品种 １０ 株 ～ ２０ 株 ， 对照 品种设置同 ４．１．１．１ ， 待烟苗成活后 ， 每株按 ０．２５ｇ ～ ０．５０ｇ 菌谷量接种 ， 置于温度 ２８℃ 、 相对湿度 ８０％ 的条件下诱发病害 。 ４ ． １ ． ２ ． ２ 　 分级及调查方法 病害严重度分级应符合 ＧＢ ／ Ｔ２３２２２ 的规定 。 调查时间 ： 接种后第 ３ｄ 、 ５ｄ 、 ７ｄ 、 １０ｄ 调查病情 。 每次均应调查各品种全部植株 。 ４ ． ２ 　 青枯病 ４ ． ２ ． １ 　 田间病圃鉴定 ４ ． ２ ． １ ． １ 　 鉴定方法 选择排灌方便 ， 肥力水平中等 ， 连年发病较重的烟田作鉴定圃 ， 观察品种对青枯病的抗性 。 每品种 种植 １ 行 ， 每行 ２０ 株 ， 至少 ３ 次重复 ， 随机排列 ， 设抗病品种 “ Ｄ１０１ ”、 感病品种 “ 长脖黄 ” 为对照 。 各地 增设当地抗 、 中 、 感品种为对照 。 参鉴烟草品种在全生育期内不使用杀菌剂 ， 杀虫剂的使用根据病圃内 害虫发生种类和程度而定 。 ４ ． ２ ． １ ． ２ 　 分级及调查方法 病害严重度分级应符合 ＧＢ ／ Ｔ２３２２２ 的规定 。 调查时间 ： 在田间发病初期 、 盛期和末期 ， 进行田间调查 ， 每次均应调查各品种全部植株 。 ４ ． ２ ． ２ 　 室内苗期接种鉴定 ４ ． ２ ． ２ ． １ 　 鉴定方法 烟苗长至 ５ 片 ～ ６ 片真叶时 ， 移栽至直径大于 １０ｃｍ 的花盆 ， 待烟苗成活后 ， 用伤根灌菌液的方法 ， 每个品种至少 ５ 株烟苗 ， ３ 次重复以上 。 对照品种设置同 ４．２．１．１ 。 每株灌 ２０ｍＬ 的青枯菌悬浮液 （ ３×１０ ８ ＣＦＵ ／ ｍＬ ）。 接种后置于温度 ２８℃ ～ ３０℃ ， 相对湿度 ８０％ 以上的环境中 ， 观察发病情况 。 接种体制备 ： 接种体选用当地流行病原菌或根据试验需要选取菌株 。 将 ４℃ 下保存于无菌水中的 青枯菌 ， 在肉汁培养基平板上划线 ， ２８℃ ～ ３０℃ 下培养 ２４ｈ ， 挑取典型菌落移置于肉汁斜面 ， ２８℃ 培养 ２４ｈ 后移至肉汁斜面 ， 继续培养 ２４ｈ 后用无菌水稀释 ， 至所需要的接菌浓度 。 ４ ． ２ ． ２ ． ２ 　 分级及调查方法 病害严重度分级应符合 ＧＢ ／ Ｔ２３２２２ 的规定 。 调查时间 ： 接种后第 ７ｄ 、 １０ｄ 、 １５ｄ 、 ２１ｄ 、 ３０ｄ 进行调查 ， 每次均应调查各品种全部植株 。 ４ ． ３ 　 炭疽病 ４ ． ３ ． １ 　 菌种的培养 菌种的培养采用马铃薯葡萄糖琼脂 （ ＰＤＡ ） 培养基 ， ２６℃ 下培养 ７ｄ ， 用培养产生的分生孢子制备悬 浮液供接种用 。 ４ ． ３ ． ２ 　 接种材料的准备 将烟苗移栽到直径大于 １０ｃｍ 的花盆内 ， 每品种至少 ３ 次重复 ， 每重复至少 ５ 株烟苗 。 ４ ． ３ ． ３ 　 接种方法 于烟苗 ５ 片 ～ ６ 片真叶时进行炭疽菌孢子 （ １×１０ ６ ＣＦＵ ／ ｍＬ ） 接种 ， 用小型手持喷雾器将孢子悬浮 ２ 犌犅 ／ 犜 ２３２２４ — ２００８ 液喷洒到植株上 ， 以叶片正反面充分湿润为宜 。 接种后在保持温度 ２６℃ ～ ３０℃ 、 相对湿度 ８０％ 以上环 境条件下生长 。 ４ ． ３ ． ４ 　 分级及调查方法 病害严重度分级应符合 ＧＢ ／ Ｔ２３２２２ 的规定 。 调查时间 ： 接种后第 ５ｄ 、 １０ｄ 、 ２０ｄ 分别调查发病程度 ， 每次均应调查各品种全部植株 。 ４ ． ４ 　 根结线虫病 ４ ． ４ ． １ 　 温室接种鉴定 ４ ． ４ ． １ ． １ 　 接种体制备 接种体选用当地优势种及生理小种或根据试验需要选取 ， 利用感病的番茄品种 “ Ｒｕｔｇｅｒｓ ” 接种繁殖 根结线虫 ， 在 ２５℃ ～ ３０℃ 下生长 ５５ｄ ～ ６０ｄ 后即可作为接种体使用 。 ４ ． ４ ． １ ． ２ 　 接种方法 采用线虫卵或病土接种法 。 烟苗长至 ３ 片 ～ ４ 片真叶时 ， 移栽至直径大于 １０ｃｍ 的花盆内 ， 烟苗每 盆接种 ５０００ 个线虫卵 ； 或将其栽入装有病土 （ 病根及根际病土与消毒营养土按 １∶４ 混合 ） 的花盆中 ， 接种后按常规管理并防止其他病虫干扰 。 在室温为 ２５℃ ～ ３０℃ 条件下生长 。 设感病品种 “ 长脖黄 ”、 抗病品种 “ Ｔ１７０６ ” 和 “ ＮＣ９５ ” 为对照 。 设当地的抗病品种 、 中抗品种和感病品种为对照 。 每处理 ５ 株 ， 随机排列 ， 至少 ３ 次重复 。 ４ ． ４ ． １ ． ３ 　 分级及调查方法 病害严重度分级应符合 ＧＢ ／ Ｔ２３２２２ 的规定 。 调查时间 ： 接种后 ２ 个月 ， 拔出烟株 ， 用自来水冲去根部泥土 ， 调查全部烟株根结线虫病病情 。 ４ ． ４ ． ２ 　 田间鉴定 ４ ． ４ ． ２ ． １ 　 鉴定方法 选择根结线虫连年为害较重的田块 ， 在自然发病条件下 ， 鉴定品种对根结线虫的抗性 ， 每品种至少 种 １ 行 ， 每行 ２０ 株 ， 随机排列 ， 至少设 ３ 次重复 ， 对照品种与 ４．４．１．２ 相同 。 ４ ． ４ ． ２ ． ２ 　 分级与调查方法 病害严重度分级应符合 ＧＢ ／ Ｔ２３２２２ 的规定 。 调查时间 ： 收获期拔根调查病情 ， 调查全部烟株根结线虫病病情 。 ４ ． ５ 　 赤星病 ４ ． ５ ． １ 　 温室苗期接种鉴定 ４ ． ５ ． １ ． １ 　 接种体的制备 将烟草