ICS11.020 C05 中华人民共和国国家标准 GB/T26352—2010 蜚 蠊抗药性检测方法 德国小蠊生物测定法 Testmethodsofcockroachresistancetoinsecticides—Thebioassaymethodsfor Blattellagermanica 2011-01-14发布 2011-05-01实施 中华人民共和国卫生部 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本标准起草单位:北京市疾病预防控制中心、中国农业大学、中国人民解放军军事医学科学院微生 物流行病研究所。 本标准主要起草人:曾晓芃、马彦、高希武、钱坤、薛素琴、佟颖、董言德。 ⅠGB/T26352—2010 蜚蠊抗药性检测方法 德国小蠊生物测定法 1 范围 本标准规定了德国小蠊(Blattellagermanica)对有机磷类、氨基甲酸酯类、拟除虫菊酯类等杀虫药 剂抗药性的诊断剂量法和敏感基线法。 本标准适用于德国小蠊抗药性的生物测定。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 诊断剂量 diagnosticdose 由敏感品系的敏感基线计算得到的与死亡率99%或99.9%相对应的杀虫药剂剂量值。 2.2 F1代 F1generation 从现场捕捉的德国小蠊,繁殖后得到的第一代。 3 试虫 现场采集德国小蠊,室内饲养,F1代羽化后7d~15d的雄性成虫。 4 试剂 丙酮或其他有机溶剂,CO2或乙醚,杀虫剂原药 5 仪器 养虫缸,500mL的锥形瓶,微量点滴器或微量进样器。 6 测试条件 温度:25℃±1℃,相对湿度:50%~80%。 7 敏感基线法 7.1 原理 依据杀虫剂应用剂量和死亡机率值关系建立毒力回归方程,以敏感品系得到的杀虫剂毒力回归线 1GB/T26352—2010 作为敏感基线。以待测昆虫种群得到的杀虫剂毒力回归线与敏感基线对比,来确定待测种群的抗性水 平。具体是比较两条毒力回归线的b值变化以及由毒力回归线计算得到的半数致死量的变化。 7.2 操作步骤 7.2.1 药膜法 用丙酮或其他的有机溶剂将供试杀虫药剂配成一定浓度的母液。用丙酮或其他易挥发的有机溶剂 将杀虫药剂母液稀释至一个系列浓度,通过预实验确定药剂的浓度系列范围,最低浓度时死亡率小于 20%,最高浓度时大于80%。取不同浓度药剂溶液2.5mL加于500mL锥形瓶中,不断转动锥形瓶, 使药液均匀分布于瓶内壁,置于通风橱中过夜,使有机溶剂全部挥发。然后每瓶放试虫10头,用纱网或 纱布封口。每个浓度试验重复3次,以相应溶剂处理为对照组。24h后记录死亡数。 7.2.2 点滴法 用丙酮或其他的有机溶剂将供试杀虫药剂配成一定浓度的母液。用丙酮或其他易挥发的有机溶剂 将杀虫药剂母液稀释至一个系列浓度,通过预实验确定药剂的浓度系列范围,最低浓度时死亡率小于 20%,最高浓度时大于80%。试虫用二氧化碳或乙醚麻醉,用微量点滴器将1μL杀虫剂药液点滴于雄 性成虫第2、3对足基节间的胸部腹板上,以点滴相应溶剂为对照组。每个浓度试验重复3次。将处理 后的试虫转入清洁容器内,供给水和食物。24h后记录死亡数。 7.3 死亡判断 试虫不能正常爬行或完全不动视为死亡。 7.4 结果表述 结果用抗性倍数表述,抗性倍数=待测种群LC50(LD50)值/敏感种群LC50(LD50)值。 7.5 判别标准 敏感品系和测定样本95%置信限不重叠,且抗性倍数大于等于5倍为抗性种群。 8 诊断剂量法 8.1 原理 依据药剂对敏感品系的毒力回归线,确定一个能够区分敏感个体和抗性个体或抗性杂合子的剂量。 一般用2倍敏感品系的LD99(LC99)值作为诊断剂量。根据待检测德国小蠊种群在诊断剂量下的死亡 率做为抗性判定标准。 8.2 操作步骤 8.2.1 药膜法 用丙酮或其他的有机溶剂将供试杀虫药剂配成一定浓度的母液。用丙酮或其他易挥发的有机溶剂 将杀虫药剂母液稀释到一定的浓度,取2.5mL溶液加于500mL锥形瓶中(锥形瓶内表面药膜的最终 剂量达到诊断剂量,常见杀虫药剂对敏感德国小蠊品系的诊断剂量参见表A.1),不断转动锥形瓶,使药 液均匀分布于瓶内壁,置于通风橱中过夜,使有机溶剂全部挥发。然后每瓶放试虫10头,用纱网或纱布 封口。试验重复10次,以相应溶剂处理为对照组。24h后记录死亡数。 2GB/T26352—2010 8.2.2 点滴法 用丙酮或其他的有机溶剂将供试杀虫药剂配成一定浓度的母液。用丙酮或其他易挥发的有机溶剂 将杀虫药剂母液稀释到诊断剂量需要的浓度(常见杀虫药剂对敏感德国小蠊品系的诊断剂量参见 表A.1)。试虫用二氧化碳或乙醚麻醉,用微量点滴器将1μL杀虫剂药液点滴于雄性成虫第2、3对足 基节间的胸部腹板上,以点滴相应溶剂为对照组。每次测定至少处理100头试虫。将处理后的试虫转 入清洁容器内,供给水和食物。24h后记录死亡数。 8.3 死亡判断 试虫不能正常爬行或完全不动视为死亡。 8.4 结果表述 结果用死亡率表述,计算见公式(1)。 M=Nm N×100% ………………………………(1) 式中: M ———死亡率; Nm———死亡虫数; N———试虫总数。 对照死亡率小于5%无需校正;对照死亡率在5%~20%之间,用Abbott公式进行校正;对照死亡 率大于20%为无效测定。 依据Abbott公式校正死亡率,计算见公式(2)。 Mm=Mt-Mc 1-Mc×100% ………………………………(2) 式中: Mm———校正死亡率; Mt———处理组死亡率; Mc———对照组死亡率。 8.5 判别标准 校正死亡率小于80%为抗性种群。GB/T26352—2010 GB/T26352—2010 附 录 A (资料性附录) 常见杀虫药剂对敏感德国小蠊品系的诊断剂量 表A.1给出了常用杀虫药剂对敏感德国小蠊品系的诊断剂量。 表A.1 常见杀虫药剂对敏感德国小蠊品系的诊断剂量 杀虫药剂诊断剂量(点滴法) LC99 μg/头诊断剂量(药膜法) LC99 mg/L 残杀威(propoxur) 1.0 1.1×10-4 氯菊酯(permethrin) 1.5 — 溴氰菊酯(deltamethrin) 0.1 — 氯氰菊酯(cypermethrin) 0.5 — 敌敌畏(DDVP) 1.0 3.5×10-4 注:敏感品系来自北京市疾病预防控制中心医学昆虫饲养室,测定时间为2004年10月。 0102—25362T / BG