ICS65.020.01 B16 中华人民共和国国家标准 GB/T28091—2011 剑 线虫属(传毒种类)检疫鉴定方法 DetectionandidentificationofXiphinemaspp.asvirusvectors 2011-12-30发布 2012-06-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国珠海出入境检验检疫局、浙江大学和珠海市质量计量监督检 测所。 本标准主要起草人:张卫东、郑经武、廖力、蒋立琴、张燕、郭恺、陈其文、乐海洋、徐淼锋、迟远丽、 吴长坤、彭仁。 ⅠGB/T28091—2011 剑线虫属(传毒种类)检疫鉴定方法 1 范围 本标准规定了剑线虫属传毒种类的检疫鉴定方法。 本标准适用于植物根系、土壤及栽培介质中剑线虫属传毒种类的检疫鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T24830 拟毛刺线虫属(传毒种类)检疫鉴定方法 SN/T1157 进出境植物苗木检疫规程 SN/T1158 进出境植物盆景检疫规程 3 剑线虫属(传毒种类)基本信息 中文名:剑线虫属(传毒种类)。 学名:Xiphinemaapp.。 英文名:virusvectorsspeciesofDaggernematode。 剑线虫属传毒种类隶属于线虫门Nematoda(Rudolphi,1808)Lankester,1877、无侧尾腺纲Ade- nophoreaLinstow,1905、矛线目DorylaimidaPearse,1942、长针线虫科Longidoridae(Thorne,1935) Filipjev,1934剑线虫属XiphinemaCobb,1913。 剑线虫传毒种类是植物根系的迁移性外寄生线虫,主要依靠土壤、介质土和带根苗木、球茎等寄主 植物材料的调运传播。 剑线虫属(传毒种类)的其他信息参见附录A。 4 方法原理 将现场检疫中发现的介质土、土壤以及植株,送实验室经漏斗法或浅盘法分离获得线虫,制成临时 或永久玻片,显微镜下对雌、雄虫主要鉴定特征仔细观察并测量数据,依据本标准描述的剑线虫属传毒 种类形态鉴定特征与其基本生物学信息,按系统分类学方法,鉴定其生物学种类。 5 仪器和用具 仪器和用具按GB/T24830执行。 6 试剂 试剂按GB/T24830执行,分样筛选用300目。 1GB/T28091—2011 7 现场检测 对苗木、球茎等寄主材料进行检查,注意观察苗木的生长状况、根部为害状,以及是否带介质、土壤 等。重点选取植株矮化、萎缩,根部肿大、粗短、畸形,侧根丛生等症状的苗木及根际介质或土壤,如无可 疑症状则按要求随机取样。取样后立即置密封塑料袋,标记后及时送实验室检测。 具体抽样比例按SN/T1157和SN/T1158执行。 8 实验室检测 8.1 线虫分离 线虫分离按GB/T24830执行。 8.2 体视显微镜镜检 分离获得的水样在10倍以上体视显微镜检查,观察线虫的形态结构。 8.3 标本制作 标本制作按GB/T24830执行。 8.4 生物显微镜观察、摄影和测量 应针对雌、雄虫主要鉴定特征仔细观察并显微摄影,重点包括整体形态、头区轮廓、齿尖针、尾部形 态、雌虫生殖系统及雄虫交合刺等,并在每张图片上加相应标尺,测量并计算a、b、c和V等值。 9 形态鉴定特征 9.1 剑线虫属形态鉴定特征 9.1.1 雌虫 虫体细长,热杀死后虫体直或腹弯或呈“C”形、开螺旋形。头部圆、连续或缢缩;侧器口宽裂缝状, 侧器囊倒马镫形或漏斗形;齿尖针细长、针状、高度硬化,齿尖针基部呈叉状,齿托基部呈显著的凸缘状; 齿针导环为双环、后环高度硬化,导环位于齿尖针后部靠近齿尖针与齿托相连接处;背食道腺核位于背 食道腺开口附近、大于腹亚侧腺核。雌虫生殖腺有4种类型:前后生殖腺均发育完全的双生殖腺型、前 生殖腺退化但结构尚完整的双生殖腺型、前生殖腺退化且结构不完全的假单生殖腺型和无前生殖腺的 单生殖腺型等,有些种类的子宫内有骨化结构。尾部形态多样:短、半球形、有或无1个指状尾突,圆锥 形,前部圆锥形后部渐变细成丝状等。 9.1.2 雄虫 雄虫(有些种至今未发现)体长、形态、头部、口针、食道和尾形的特征均似雌虫,双生殖腺、对伸,交 合刺矛线型、粗壮、有侧附导片,斜纹交配肌发达、由泄殖腔向前延伸,泄殖腔区有1对交配乳突,其前一 段距离有1列腹中交配乳突(最多7个)。 9.2 剑线虫属传毒种类的形态鉴定特征 剑线虫属传毒种类形态鉴定特征参见附录B和附录C。 2GB/T28091—2011 9.2.1 美洲剑线虫(X.americanumCobb,1913) 雌虫虫体细长(1.4mm~1.7mm),形成一个开阔的螺旋形;唇区半球形、轻微膨胀;齿尖针中空, 长约为72μm,基部分叉;齿托有凸缘,长约为45μm~47μm;双生殖腺,在输卵管处回折,子宫伸长, 窄、内无特殊分化结构;尾呈圆锥形,背面有一大弯,末端半球形,末端角质层无盲管。雄虫极少,虫体与 雌虫相似,但后三分之一部分比雌虫弯曲更大;精巢成对,伸展而对称;交合刺很直,骨化,长为29μm。 9.2.2 贝克剑线虫(X.bakeriWilliams,1961) 雌虫虫体细长(3.7mm~4.7mm),热杀死后弯曲成钩状;唇区与体壁不连续,轻微缢缩;口针细 长,齿针和齿托部之和超过200μm;阴门位置较前,双卵巢,两侧生殖系统结构完整,长度相同或几乎相 同,无子宫分化;尾短圆锥形,末端有一指状突。雄虫极少发现。 9.2.3 拜西尔剑线虫(X.basiriSiddiqi,1959) 雌虫虫体细长(2.9mm~3.5mm),弯曲成钩状或螺旋形;唇区轻微缢缩,齿尖针和齿托长度分别 为120μm~132μm和54μm~70μm;生殖腺成对,两侧生殖系统结构完整,长度相同或几乎相同,子 宫存在假“Z”字形结构;尾短圆锥形,末端有一明显指状突。雄虫稀少。 9.2.4 X.brevicollumLordello,1961 雌虫虫体细长(1.8mm~2.2mm),弯曲呈螺旋形或钩状;唇区与体壁不连续,缢缩;齿尖针和齿托 之和在86μm~150μm之间;双生殖腺,两侧生殖系统结构完整,长度相同或几乎相同,子宫无分化器 官;尾短圆锥形或半圆形,背面呈一个突圆形的大弯,腹面呈指状,尾尖钝圆。 9.2.5 加州剑线虫(X.californicumLamberti,1979) 雌虫虫体细长(1.8mm~2.2mm),弯曲呈螺旋形或钩状;唇区与体壁不连续,缢缩;齿尖针长 83μm~98μm;双生殖腺,对伸,子宫无分化,“Z”字型器官缺失;尾短圆锥形至半圆形,背面呈一个突圆 形的大弯,腹面呈指状,尾尖圆锥形,末端角质层无盲管。 9.2.6 考克斯剑线虫(X.coxiTarjan,1964) 雌虫虫体细长(3.1mm~4.0mm),热杀死后呈“C”字形;唇区轻微缢缩,齿尖针和齿托长度分别 为113μm~127μm和68μm~82μm;双生殖腺,两侧生殖系统结构完整,长度相同或几乎相同,子宫 存在假“Z”字形结构;尾短圆锥形,末端有一指状突。雄虫稀少。 9.2.7 裂尾剑线虫(X.diversicaudatumMicoletzky,1927) 雌虫虫体细长(4.0mm~5.5mm),热杀死后体弯曲;唇区扁,光滑,缢缩;齿尖针平均长度为 143μm;双卵巢,折叠,两侧生殖系统结构完整,长度相同或几乎相同,每个子宫有一个明显的假“Z”字 形器官;尾部尾短圆锥形,末端有一指状突。雄虫虫体与雌虫类似,齿尖针长134μm,基部有分叉,齿托 长75μm,导环距齿针尖前端125μm;交合刺强大,中央弯曲,长度为75μm,侧引带15μm。 9.2.8 标准剑线虫(X.indexThorn,1950) 雌虫虫体为长圆柱形(2.8mm~3.6mm),形成一个开阔的螺旋形;唇区为半圆形,有轻微缢缩; 齿尖针中空,平均长度为126μm,基部分叉与齿托形成牢固的连接,齿托长约为70μm,有3个大的凸 缘;生殖腺成对,在输卵管处回折,子宫腔高度肌肉化,长与体宽接近,无子宫分化,“Z”器官缺失;尾短 圆锥形至半圆形,末端有圆形或半圆形指状突,背面呈一个突圆形的大弯,腹面呈指状。雄虫数量极少, 3GB/T28091—2011 对繁殖不起决定性作用;虫体形态,唇区,食道,尾形等都与雌虫相似;交合刺粗状,但不骨化,长约为 63μm。 9.2.9 意大利剑线虫(X.italiaeMeyl,1953) 雌虫虫体细长(2.3mm~2.8mm),热杀死后弯曲成“C”字形;唇区与体壁不连续,明显缢缩;齿尖 针长度87μm~96μm,齿托长度为54μm~64μm;双卵巢,两侧生殖系统结构完整,长度相同或几乎 相同,无子宫分化;尾长圆锥形。雄虫极少发现。 9.2.10 里弗斯剑线虫(X.rivesiDalmasso,1969) 雌虫虫体细长(1.7mm~2.1mm),弯曲呈螺旋形或钩状;唇区与体壁连续,无缢缩;齿尖针长度 90μm~101μm;双卵巢,两侧生殖系统结构完整,长度相同或几乎相同,子宫无分化,“Z”字形器官缺 失;尾短圆锥形至半圆形,背面呈一个突圆形的大弯,腹面呈指状,尾尖端圆,末端角质层无盲管。 9.2.11 塔简剑线虫(X.ta