ICS65.020.01 B16 中华人民共和国国家标准 GB/T28977—2012 菊 花滑刃线虫检疫鉴定方法 Detectionandidentificationof Aphelenchoidesritzemabosi(Schwartz)Steiner&Buhrer 2012-12-31发布 2013-06-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。 本标准起草单位:宁波检验检疫科学技术研究院、广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心。 本标准主要起草人:顾建锋、王江岭、张慧丽、赵立荣、陈先锋、闻伟刚。 ⅠGB/T28977—2012 菊花滑刃线虫检疫鉴定方法 1 范围 本标准规定了菊花滑刃线虫的检疫鉴定方法。 本标准适用于植物和繁殖材料、介质、土壤中菊花滑刃线虫的检疫和鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T24829 毛刺线虫属(传毒种类)检疫鉴定方法 3 菊花滑刃线虫基本信息 学名 Aphelenchoidesritzemabosi(Schwartz,1911)Steiner&Buhrer,1932。 英文名 chrysanthemumfoliarnematode、chrysanthemumleafnematode、budandleafnematode ofchrysanthemum、foliarnematodeofchrysanthemum或chrysanthemumeelworm。 中文名又称菊花叶线虫、菊花芽线虫、菊花叶芽线虫、腋芽滑刃线虫、菊花叶枯线虫或里泽马博斯滑 刃线虫。 属滑刃目Aphelenchida,滑刃科Aphelenchoididae,滑刃属Aphelenchoides。 菊花滑刃线虫是植物专性寄生线虫,主要外寄生或内寄生于多种寄主植物的芽、叶或花,也可存活 于种子及土壤中,主要通过植物繁殖材料和鲜切花等进行远距离传播。 相关种类有草莓滑刃线虫A.fragariae(RitzemaBos)Christie、水稻干尖线虫A.besseyiChristie 和毁芽滑刃线虫A.blastophthorusFranklin等。 菊花滑刃线虫的其他信息参见附录A。 4 方法原理 根据菊花滑刃线虫的危害状,在检疫现场肉眼观察,选取变色、畸形的花、叶、芽以及根际介质或土 壤,用直接浸泡法或漏斗法等进行线虫分离,用显微镜观察,根据形态特征对种类进行判定。雌虫尾尖 突和雄虫交合刺形态是重要的种类鉴定依据。 5 器材与试剂 见GB/T24829。 6 症状检查 现场检疫时要注意观察植株花、叶、芽等是否有枯死、褐色角斑、矮小、畸形等受害症状(参见附录 1GB/T28977—2012 A),以及是否带介质、土壤等。重点选取表现上述症状的花、叶、芽等植物组织及根际介质或土壤,如无 可疑症状则按要求随机取样。取样后立即置密封塑料袋,标记后及时送实验室检测。 7 实验室检验 7.1 线虫分离 实验室接到样品后应立即进行线虫分离。若不能及时分离,可将样品保存在4℃~10℃冷藏箱 中。种子、花、叶、芽、茎等可用直接浸泡法或漏斗法分离线虫,介质或土壤适宜用漏斗法或浅盘分离法 等分离线虫(参见GB/T24829)。 7.2 体视显微镜镜检 菊花滑刃线虫体长约1000μm,放大10倍以上可见。虫体细长,在水中不停作“S”形扭动,行动 活跃。 7.3 标本制作 若镜检发现线虫,需制作临时玻片或永久玻片(参见GB/T24829)。 7.4 生物显微镜观察、摄影和测量 应针对雌、雄虫主要鉴定特征仔细观察并显微摄影,主要鉴定特征包括雌虫尾尖突形态、后阴子宫 囊、尾形、口针、侧线、排泄孔和神经环位置、雄虫交合刺等。应在每张图片上加相应标尺,测量并计算 a、b、b’、c、c’、V等值。如样品足够,应测量雌、雄虫各15条以上。 8 形态学鉴定 8.1 滑刃属线虫形态鉴定特征 雌虫:体长0.5mm~1.2mm,热杀死后虫体直或略腹弯;头部高圆,常有明显缢缩,头架骨化弱; 口针细弱,长约10μm~12μm,不超过20μm;中食道球发达,瓣门显著;雌虫阴门位于虫体中后部,一 般位于体长的60%~75%;单生殖腺、前伸,偶尔有回折;卵母细胞单行或多行排列;后阴子宫囊通常存 在,并含有精子;尾圆锥形,有或无尾尖突,尾尖突形态多变。 雄虫:热杀死后尾端强烈腹弯,整个虫体呈“J”形;交合刺玫瑰刺状、成对、不愈合;基顶和喙通常发 达,有时缺;尾乳突通常3对,无交合伞。 8.2 菊花滑刃线虫测计值 测计值见表1。 表1 菊花滑刃线虫测计值 菊花滑 刃线虫特征 L mm体宽 μm后阴子宫 囊长 μma b b’ c c’ V或T 雌虫0.77~1.2016.5~19.5115~14740.0~60.58.1~13.04.5~6.116.0~23.13.7~5.166.0~75.0 2GB/T28977—2012 表1(续) 菊花滑 刃线虫特征 L mm体宽 μm后阴子宫 囊长 μma b b’ c c’ V或T 雄虫0.63~0.9316.0~19.2—31.0~53.310.0~14.04.3~5.016.0~30.02.8~3.135.0~64.0 注1:L=体长;a=体长/最大体宽;b=体长/虫体前端至食道与肠连接处的距离;b’=体长/虫体前端至食道腺末 端的距离;c=体长/尾长;c’=尾长/肛门处体宽;St=口针长;V=虫体前端至阴门的距离×100/体长;T= 泄殖腔口至精巢末端的距离×100/体长。 注2:表内数据综合参考Allen,1952;Vovlas等,2005;Chizhov等,2006;Crozzoli等,2008。 8.3 菊花滑刃线虫形态鉴定特征 雌虫:虫体细长,0.7mm~1.2mm;体环明显(宽为0.9μm~1.0μm),侧区为体宽的六分之一至 五分之一,侧线4条;头部近半球形,缢缩明显,头架骨化弱;口针细弱,针锥部急剧变尖,基部球小而明 显;食道前体部较细,中食道球发达、卵形,瓣门显著,背、腹食道腺开口于中食道球;食道腺长叶状,背覆 盖肠,长约4倍体宽;食道与肠交接处位于中食道球后约8μm处,神经环位于中食道球后约1.5倍体 宽处,排泄孔位于神经环后约0.5~2倍体宽处;单卵巢前伸,卵母细胞多行排列;阴门横裂,阴门唇梢突 起;后阴子宫囊发达,长度超过肛阴距的1/2,通常含有精子;尾长圆锥形,末端有2~4个尾尖突,使尾 端侧面观呈刷状。 雄虫:较常见,虫体尾部向腹面弯曲超过180°;单精巢前伸,交合刺玫瑰刺形,平滑弯曲,基顶和喙 不显著,背边长20.0μm~26.5μm;尾乳突3对,第1对位于泄殖腔附近,第2对位于尾中部,第3对位 于近尾端;尾端有2~4个尾尖突,形态多变(参见附录B、附录C、附录D)。 8.4 与近似种的区别 菊花滑刃线虫雌虫与属内其他近似种(主要是尾尖突呈星形的种类)的比较参见附录E。 除菊花滑刃线虫外,滑刃属线虫中植物寄生线虫主要还有草莓滑刃线虫A.fragariae、水稻干尖线 虫A.besseyi和毁芽滑刃线虫A.blastophthorus。 菊花滑刃线虫和水稻干尖线虫的区别是前者排泄孔位于神经环后0.5~2倍体宽处,后阴子宫囊长 度超过肛阴距的二分之一,而后者排泄孔位于神经环对应处,后阴子宫囊小于肛阴距的三分之一。 菊花滑刃线虫与草莓滑刃线虫、毁芽滑刃线虫的主要区别是雌虫尾尖突:草莓滑刃线虫雌虫末端钝 尖,无尾尖突;毁芽滑刃线虫只有1个尾尖突。 9 结果判断 以雌虫和雄虫的形态学特征为主要鉴定依据。菊花滑刃线虫的主要鉴定特征是:侧线4条;雌虫后 阴子宫囊长超过肛阴距的二分之一,常充满精子;尾长圆锥形,尾尖突复杂,为2~4个向后伸的尾尖突, 形成刷状结构。雄虫交合刺平滑腹弯,无基顶和喙。符合上述特征,可鉴定为菊花滑刃线虫,寄主与地 理分布等信息可供参考。 3GB/T28977—2012 10 记录和标本样品保存 若鉴定为菊花滑刃线虫,应将剩余的线虫杀死、固定后制成永久玻片保存;也可用4%甲醛固定后 于指形管中长期保存。应保存的记录信息包括样品编号、为害症状(包括相关照片)、被感染材料的状态 和来源、经鉴定的有害生物学名、测计数据、显微照片、标本鉴定人、鉴定时间、制作人、制作时间等信息。 对含有线虫的剩余样品材料,经登记后妥善保存。保存期至少为6个月,期满后视情况作销毁 处理。 4GB/T28977—2012 附 录 A (资料性附录) 菊花滑刃线虫其他信息 A.1 生物学特性 菊花滑刃线虫是专性寄生线虫,可以在寄主植物叶片组织内寄生,也可以在叶芽、花芽和生长点营 外寄生生活。主要以成虫在寄主植物的芽腋、生长点、叶片及其残体上越冬。次年春天,新叶初发期,当 植物表面变得湿润时,线虫可借助水膜移动到寄主茎或叶部,从气孔或伤口入侵。当受害叶片掉落地面 时,线虫在地面只能完成部分生活史。 该种线虫营两性生殖,不能进行孤雌生殖。雌虫的后阴子宫囊可贮存精子,这些精子可向前移动, 与发育成熟的卵受精结合,因此受精后的雌虫即使不被再次受精,亦可持续生育6个月。交配后的雌成 虫在寄主植物叶片上产卵,每条雌成虫可产卵25~30粒。在17℃~24℃条件下,完成1个世代需 10d~14d。菊花滑刃线虫繁殖力强,1年可以完成10代左右。