ICS13.300;11.100 A80 中华人民共和国国家标准 GB/T29763—2013 化 学品 稀有鮈鲫急性毒性试验 Chemicals—RareMinnow(Gobiocyprisrarus)acutetoxicitytest 2013-09-18发布 2014-03-20实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。 本标准起草单位:上海市检测中心、环境保护部化学品登记中心、中国科学院水生生物研究所、中国 检验检疫科学研究院、环境保护部南京环境科学研究所、沈阳化工研究院有限公司安全评价中心。 本标准主要起草人:殷浩文、张京佶、赵华清、沈英娃、刘纯新、聂晶磊、王剑伟、陈会明、李晞、石利利、 刘济宁、王蕾、蔡磊明、赵玉艳。 ⅠGB/T29763—2013 化学品 稀有鮈鲫急性毒性试验 1 范围 本标准规定了稀有鮈鲫化学品急性毒性试验的方法,包括静态试验、半静态试验和流水式试验三种 方式,受试物所需信息、原理、设备与材料、试验系统、试验程序、质量控制和结果报告。 本标准适用于测试稀有鮈鲫的化学品急性毒性。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T27861 化学品 鱼类急性毒性试验 3 术语和定义 GB/T27861界定的术语和定义适用于本文件。 4 受试物所需信息 受试物所需信息包括: a) 水中溶解度; b) 蒸气压; c) 结构式; d) 纯度; e) 在水中和光照条件下的稳定性; f) pKa值; g) 水溶液中的定量分析方法; h) 正辛醇-水的分配系数(Pow); i) 快速生物降解试验结果。 5 原理 5.1 用于测定受试物短期暴露对稀有鮈鲫可能产生的影响,以评价受试物的短期毒性。 5.2 将稀有鮈鲫暴露于含不同浓度受试物的水溶液,以96h为试验周期,在24h、48h、72h和96h时 记录受试鱼的死亡率,确定50%稀有鮈鲫死亡时的受试物浓度,用LC50表示。 6 设备与材料 6.1 仪器设备 仪器设备包括: 1GB/T29763—2013 a) 溶解氧测定仪(1%); b) 水硬度计(1mg/L); c) 温度控制系统(0.1℃); d) pH计(0.1pH); e) 分析天平(0.0001g); f) 惰性材料制成的水族箱或水槽1),规格一致,体积适宜; g) 适用于流水式的连续分配和稀释系统(如,计量泵、稀释仪等)。 6.2 材料与试剂 标准稀释水用到的试剂包括: a) 氯化钙; b) 硫酸镁; c) 碳酸氢钠; d) 氯化钾。 1) 根据样品理化特性,选择材料合适的试验容器。如,玻璃等。 2) 根据试验方式和负荷量进行选择。所有试剂应是分析纯,用电导率小于或等于10μS/cm的蒸馏水或去离子水配制。 7 试验系统 7.1 试验方式的选择 7.1.1 在试验之前,应根据受试物在水中的化学稳定性确定合适的试验方式,从而选定需用的容器和 装置2)。 7.1.2 试验期间,受试物在水溶液中的浓度维持在初始实测浓度的±20%内,可采用静态试验方式。 当水溶液中受试物不稳定时,即浓度变化超过±20%时,应采用半静态试验方式或流水式试验系统以维 持受试物的浓度。 7.2 稀有鮈鲫 7.2.1 选择 试验鱼种为稀有鮈鲫(Gobiocyprisrarus),全长范围为30mm±10mm。应在养鱼场和实验室条 件(pH为6.0~8.5;温度为21℃~25℃;光照为每天12h~16h;溶解氧浓度不低于空气饱和值的 80%)下驯化和饲养。应保证一次试验用鱼为同一批号,规格一致、来源可靠、健康且无明显的畸形。 7.2.2 暂养和驯养 7.2.2.1 稀有鮈鲫用于试验之前,应在实验室至少暂养12d。暂养条件可与驯养条件一致。 7.2.2.2 临试验前,应在符合下列条件的环境中至少驯养7d。 a) 水:与试验用水水质相同; b) 光照:每天12h~16h; c) 温度:21℃~25℃; d) 溶解氧浓度:不低于空气饱和值的80%; e) 喂养:每周3次或每天投食,至试验开始前24h为止。 2GB/T29763—2013 7.2.2.3 驯养开始48h后,记录死亡率,并按下列条件处理: a) 7d内死亡率小于5%,可用于试验。 b) 7d内死亡率在5%~10%之间,继续驯养7d,如果死亡不再发生,该批试验鱼可用于试验。 c) 7d内死亡率大于10%,舍弃整组鱼。 7.3 试验用水 应用标准稀释水(参见附录A)、曝气除氯的自来水或高质量的天然水。水的总硬度为10mg/L~ 250mg/L(以CaCO3计),pH为6.0~8.5。 7.4 受试物的制备 7.4.1 将受试物溶解于试验用水中配制成受试物贮备液,通过稀释贮备液配制成一定浓度的试验 溶液。 7.4.2 难溶物质的贮备液可以通过超声分散或其他适合的物理方法配制,必要时可以使用对鱼毒性低 的有机溶剂、乳化剂和分散剂。使用这些物质时应加设溶剂对照试验组,且所有试验容器中的溶剂浓度 应相同,并不应超过100mg/L或100μL/L。 7.4.3 应在加入前调节受试物贮备液的pH,使其接近试验用水的pH。调节贮备液的pH时不应使受 试物浓度明显改变,不应发生化学反应或沉淀。宜使用HCl和NaOH来调节。 7.4.4 如果加入受试物后水的pH有明显变化(超出6.0~8.5),则重新配制试验溶液。 8 试验程序 8.1 暴露条件 a) 持续时间:96h。 b) 承载量:静态和半静态试验系统每升水中鱼的总湿重不超过1.0g,流水式试验系统承载量可 适当提高。 c) 光照:每天12h~16h。 d) 温度:21℃~25℃且试验期间温度变化不超过2℃。 e) 溶解氧浓度:不应低于空气饱和值的60%。曝气时不应使受试物浓度明显变化。 f) 喂食:禁食。 g) 干扰:避免可能影响鱼行为的干扰。 8.2 预试验 8.2.1 用以确定正式试验所需浓度范围,可选择较大范围的浓度系列,如1000mg/L、100mg/L、 10mg/L、1mg/L、0.1mg/L。每个浓度组放入的稀有鮈鲫不少于3尾,不设平行组。试验时间为96h。 每日记录各容器内的死鱼数,并及时取出死鱼。 8.2.2 如果一次预试验结果无法确定正式试验所需的浓度范围,应调整浓度范围再次进行预试验。 8.3 正式试验 8.3.1 根据预试验,在包括使稀有鮈鲫全部死亡的最低浓度和96h稀有鮈鲫全部存活的最高浓度之 间至少应设置5个浓度组,并以几何级数3)排布。浓度间隔系数应小于或等于2.2。同时设一个空白对 照组。如使用了溶剂,应增设溶剂对照组,且所有试验容器中的溶剂浓度应相同。每一浓度组和对照组 应至少使用7尾稀有鮈鲫。 3) 即等比数列。 3GB/T29763—2013 8.3.2 试验溶液调节至试验温度后,从驯养鱼群中随机取出鱼并随机迅速放入各试验容器中。转移期 间处理不当的鱼均应弃除。同一试验,所有试验用鱼应在30min内分组完毕。 8.3.3 试验期间,不应对试验液强烈曝气,溶解氧含量应高于空气饱和值的60%。试验期间禁止 喂食。 8.3.4 至少在24h、48h、72h和96h后检查受试鱼的状况。如果某尾鱼没有任何肉眼可见的运动 (如,鳃的扇动),且碰触尾柄后无反应,即可判断该鱼已死亡。观察并记录死鱼数目后,将死鱼从容器中 取出。应在试验开始后3h或6h观察各试验组鱼的状况,并记录试验鱼的异常现象(如,鱼体侧翻、失 去平衡,游泳能力和呼吸功能减弱,色素沉积等)。 8.3.5 每天至少测定一次所有试验容器中的pH、溶解氧浓度和温度。试验开始和结束时也要测定。 8.3.6 在试验开始前,应建立有效的受试物在水中的化学分析方法。试验期间,应按以下要求测定受 试物在水中的浓度。 a) 静态试验方式应至少在试验开始和结束时,测定试验容器中试验溶液的受试物浓度。 b) 半静态试验方式应至少在试验开始、每一次更新前后和试验结束时,测定试验容器中试验溶 液的受试物浓度。 c) 流水式试验方式应至少在试验开始、试验中期和试验结束时,测定母液和试验容器中试验溶液 的受试物浓度。 8.4 限度试验 采用本标准时,为证明LC50是否大于100mg/L(有效成分浓度)或大于试验体系下受试物饱和溶 液浓度,可进行受试物浓度为100mg/L(有效成分浓度)或试验体系下受试物饱和溶液的限度试验。限 度试验应至少使用7尾稀有鮈鲫,与对照组使用的鱼数目相等。如使用了溶剂,应增设溶剂对照组,且 所有试验容器中的溶剂浓度应相同。如果试验鱼发生死亡,则应按本标准的试验程序进行完整的试验。 应记录所观察到的亚致死效应(如,鱼体侧翻、失去平衡,游泳能力和呼吸功能减弱,色素沉积等)。 9 质量控制 有效的试验应满足下列条件: a) 试验结束时,对照组鱼死亡率不应超过10%;如果每组鱼不到10尾,则对照组死亡不应超过 1尾; b) 试验期间,试验液的溶解氧浓度应不低于空气饱和值的60%; c) 试验期间,尽可能维持恒定条件,如有必要,应使用半静态或流水式试验方式; d) 试验期间,试验溶液中受试物浓度不应低于配制浓度的80%。如低于配制浓度的80%,应以 实测浓度来表示试验结果。 10 数据与报告 10.1 结果处理 10.1.1 采用合适的统计方法,计算出一定暴露时间的LC50值及95