ICS59.140.30 Y46 中华人民共和国国家标准 GB/T30399—2013 皮 革和毛皮 化学试验 致癌染料的测定 Leatherandfur—Chemicaltests— Determinationofcarcinogenicdyestuffs 2013-12-31发布 2014-12-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国皮革工业标准化技术委员会(SAC/TC252)归口。 本标准起草单位:中华人民共和国福建出入境检验检疫局、国家皮革质量监督检验中心(浙江)、中 国皮革和制鞋工业研究院、国家鞋类检测中心。 本标准主要起草人:陈学灿、毛树禄、陈洪波、赵立国、王玲霞、王晓霞、尹洪雷。 ⅠGB/T30399—2013 皮革和毛皮 化学试验 致癌染料的测定 1 范围 本标准规定了染色皮革、毛皮产品中9种致癌染料及能裂解释放有害芳香胺的分散黄23、分散橙 149染料的测定方法。 本标准适用于染色皮革、毛皮产品。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 QB/T1267 毛皮成品 样块部位和标志 QB/T1272 毛皮成品 化学分析试样的制备及化学分析通则 QB/T2706 皮革 化学、物理、机械和色牢度试验 取样部位 QB/T2716 皮革 化学试验样品的准备 3 原理 样品经甲醇超声波提取、滤膜过滤后,采用具有二极管阵列检测器的高效液相色谱(HPLC-DAD) 或高效液相色谱-质谱/质谱联用仪(HPLC-MS/MS)测定和确证,外标法定量。 4 试剂 除非另有说明,在分析中所用试剂均为分析纯,水为符合GB/T6682规定的二级水。 4.1 乙腈,HPLC级。 4.2 甲醇,HPLC级。 4.3 乙酸,HPLC级。 4.4 5%氨水(质量分数)。 4.5 磷酸二氢四丁基铵溶液,0.0025mol/L,用5%氨水(4.4)调节pH至7.5。 4.6 乙酸铵溶液,0.005mol/L,用乙酸(4.3)调节pH至6.0。 4.7 单组分(附录A)标准储备溶液,200mg/L甲醇溶液。 4.8 混合标准溶液,分别移取一定体积的11种致癌染料的标准储备溶液(4.7),置于同一个棕色容量 瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀。混合标准溶液的浓度可根据实际需要配制。 5 仪器和装置 5.1 管状硬质玻璃提取器,50mL,带旋盖(有聚四氟乙烯垫片)。 1GB/T30399—2013 5.2 可控温超声波发生器,输出功率:420W,频率:40kHz,(70±2)℃。 5.3 分析天平,感量:0.1mg。 5.4 一次性注射器,2mL。 5.5 聚四氟乙烯薄膜过滤头,0.45μm。 5.6 高效液相色谱仪:配有二极管阵列检测器(HPLC-DAD)。 5.7 高效液相色谱-质谱/质谱联用仪:配电喷雾离子源(HPLC-MS/MS)。 6 试样制备 6.1 取样 6.1.1 标准部位取样 6.1.1.1 皮革:按QB/T2706的规定进行。 6.1.1.2 毛皮:按QB/T1267的规定进行。 6.1.2 非标准部位取样 如果不能从标准部位取样(如直接从鞋、服装上取样),应在可利用面积内的任意部位取样,样品应 具有代表性,对于毛皮样品,取样过程应避免毛被损失,保持毛被完好,并在试验报告中详细记录取样 情况。 6.2 试样的制备 6.2.1 皮革:按QB/T2716的规定进行。 6.2.2 毛皮:按QB/T1272的规定进行。 6.2.3 除去样品上面的胶水、附着物,将试样混匀,装入清洁的试样瓶内待测。 7 试验步骤 7.1 样品前处理 称取剪碎的试样1g(精确至0.01g)置于玻璃提取器(5.1)中,加入10.00mL甲醇(4.2),旋紧盖子, 将提取器置于(70±2)℃的超声波发生器(5.2)中处理40min,冷却至室温后,滤膜(5.5)过滤,作为测试 液备用。 7.2 标准工作溶液的制备 将混合标准溶液(4.8)用甲醇配制一系列合适浓度的标准工作溶液。 7.3 HPLC-DAD方法 7.3.1 HPLC-DAD分析条件 由于测试结果与使用的仪器和条件有关,因此不可能给出色谱分析的普遍参数。采用下列参数已 被证明对测试是合适的: a) 色谱柱:ZORBAXEclipseXDB,4.6mm×250mm×5μm,或相当者; b) 流动相A:0.0025mol/L磷酸二氢四丁基铵溶液;流动相B:乙腈; c) 柱温:50℃; 2GB/T30399—2013 d) 流速:0.6mL/min; e) 检测波长:200nm~900nm; f) 定量波长:380nm,450nm,500nm,540nm和590nm; g) 进样量:20μL; h) 梯度洗脱程序:见表1。 表1 梯度洗脱程序 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 递变方式 0 20 80 线性 35 100 0 线性 40 100 0 线性 41 20 80 线性 45 20 80 线性 7.3.2 HPLC-DAD测定 分别取测试液和标准工作液进行HPLC-DAD分析,通过比较试样和标样在规定的检测波长处色 谱峰的保留时间以及光谱图进行定性,以外标法定量。 注:采用7.3.1分析条件,11种染料色谱峰保留时间、色谱图和紫外线可见光谱图参见附录A、附录B和附录C。 7.4 HPLC-MS/MS方法 7.4.1 HPLC-MS/MS分析条件 由于测试结果与使用的仪器和条件有关,因此不可能给出色谱分析的普遍参数。采用下列参数已 被证明对测试是合适的: a) 色谱柱:EclipsePlusC18,2.1mm×100mm×1.8μm,或相当者; b) 流动相A:0.005mol/L乙酸铵溶液(pH=6.0);流动相B:乙腈; c) 柱温:40℃; d) 流速:0.2mL/min; e) 进样量:2μL; f) 梯度洗脱程序:见表2。 g) 离子化模式:电喷雾电离正负离子模式; h) 质谱扫描方式:多反应监测; i) 分辨率:单位分辨率; j) 干燥气温度:325℃; k) 干燥气流量:10L/min; l) 雾化气压力:2.7×105Pa(40psi); m) 其他质谱条件参见附录D。 3GB/T30399—2013 表2 梯度洗脱程序 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 递变方式 0 20 80 线性 0.5 20 80 线性 11.0 80 20 线性 13.0 80 20 线性 13.1 20 80 线性 20.0 20 80 线性 7.4.2 HPLC-MS/MS测定 分别取测试液和标准工作液进行HPLC-MS/MS分析,通过选择两级质谱的特定离子对,比较试样 和标样色谱峰的保留时间进行定性,以外标法定量。 注:采用上述分析条件,11种染料多反应监测(MRM)色谱图参见附录E。 8 结果计算 测定结果以各种致癌染料的检测结果分别表示,以公式(1)计算结果: xi=Ai×cis×V×F Ais×m…………………………(1) 式中: xi ———试样中致癌染料i的含量,单位为毫克每千克(mg/kg); Ai———试样萃取液中致癌染料i的峰面积(或峰高); cis———标准工作溶液中致癌染料i的浓度,单位为毫克每升(mg/L); V———试样萃取液体积,单位为毫升(mL); F———稀释因子; Ais———标准工作溶液中致癌染料i的峰面积(或峰高); m———试样量,单位为克(g)。 计算结果保留到小数点后一位。 9 方法的测定低限和精密度 9.1 测定低限 HPLC-DAD法的测定低限为10.0mg/kg;HPLC-MS/MS法的测定低限为0.5mg/kg。 9.2 精密度 在同一实验室,由同一操作者使用相同的设备,按相同的测试方法,并在短时间内对同一被测对象 相互独立进行的测试获得的两次独立测试结果的相对偏差不大于10%。 4GB/T30399—2013 10 试验报告 试验报告应包含以下内容: a) 标准编号; b) 样品名称、编号、类型、厂家(或商标); c) 试验中出现的异常现象; d) 试验结果; e) 任何偏离本标准的细节; f) 试验人员、日期。 5GB/T30399—2013 附 录 A (资料性附录) 11种致癌染料的HPLC-DAD检测波长及保留时间 表A.1 11种致癌染料的HPLC-DAD检测波长及保留时间 序号 染料名称 化学文摘编号(CASNo.)保留时间 minDAD检测波长 nm 1 酸性红26 3761-53-3 19.294 500 2 碱性红9 569-61-9 8.938 540 3 碱性紫14 632-99-5 9.787 540 4 直接黑38 1937-37-7 21.490 590 5 直接红28 573-58-0 19.813 500 6 直接蓝6 2602-46-2 19.936 590 7 分散橙11 82-28-0 26.936 500 8 分散黄3 2832-40-8 15.166 380 9 分散蓝1 2475-45-8 26.193 590 10 分散黄23 6250-23-3 33.811 380 11 分散橙149 85136-74-9 37.070 450 6GB/T30399—2013