ICS71.100.70 Y42 中华人民共和国国家标准 GB/T30931—2014 化妆品中苯扎氯铵含量的测定 高效液相色谱法 Determinationofbenzalkoniumchlorideincosmetics— Highperformanceliquidchromatography 2014-07-08发布 2014-11-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会(SAC/TC257)归口。 本标准起草单位:国家化妆品质量监督检验中心(北京)、北京市海淀区产品质量监督检验所、上海 市日用化学工业研究所。 本标准主要起草人:刘艳琴、王浩、史海良、杨红梅、郭启雷、潘红艳、李琼、武晓剑、沈敏、钱茵。 ⅠGB/T30931—2014 化妆品中苯扎氯铵含量的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了化妆品中苯扎氯铵的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于膏霜、香波、水剂类等化妆品中苯扎氯铵的测定。 本标准方法检出限为30mg/kg,定量限为100mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 样品经含0.5%甲酸的甲醇溶液超声提取,旋转蒸发富集提取液后,经SCX色谱柱分离,利用二极 管阵列检测器对其进行准确分析,外标法定量,液相色谱-质谱确证。 4 试剂和材料 除非另有说明,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。 4.1 甲醇:色谱纯。 4.2 甲酸:色谱纯。 4.3 乙腈:色谱纯。 4.4 乙酸铵。 4.5 三乙胺。 4.6 氯化钠。 4.7 冰醋酸。 4.8 50%甲醇水溶液:量取500mL甲醇(4.1)与500mL水混合。 4.9 0.5%甲酸的甲醇溶液:移取5mL甲酸(4.2)至1000mL容量瓶中,甲醇(4.1)定容。 4.10 标准样品:苯扎氯铵(n-C12H25-C9H13NCl、n-C14H29-C9H13NCl、n-C16H33-C9H13NCl)标准样品纯 度不小于99%。苯扎氯胺标准样品信息参见附录A。 4.11 标准溶液 4.11.1 3种苯扎氯铵(n-C12H25-C9H13NCl、n-C14H29-C9H13NCl、n-C16H33-C9H13NCl)标准储备液:各 称取0.5g(精确至0.0001g)n-C12H25-C9H13NCl、n-C14H29-C9H13NCl、n-C16H33-C9H13NCl标准样品 (4.10),分别置于100mL容量瓶中,用50%甲醇水溶液(4.8)溶解定容。 4.11.2 苯扎氯铵(n-C12H25-C9H13NCl、n-C14H29-C9H13NCl、n-C16H33-C9H13NCl)混合标准工作溶液: 1GB/T30931—2014 分别准确吸取3种标准储备溶液(4.11.1)0.0mL、0.1mL、0.5mL、1.0mL、5.0mL、10.0mL置于 50mL容量瓶中,用含0.5%甲酸的甲醇溶液(4.9)定容,得到浓度分别为0.00mg/mL、0.01mg/mL、 0.05mg/mL、0.10mg/mL、0.50mg/mL、1.00mg/mL的混合标准工作溶液。 4.12 乙酸铵溶液:称取3.08g乙酸铵(4.4)置于烧杯中,加水溶解并定容至1000mL,加1mL三乙胺 (4.5),用冰醋酸(4.7)调节至pH=4.0,过0.45μm滤膜(4.13),待用。 4.13 滤膜:0.45μm,有机相。 5 仪器与设备 5.1 高效液相色谱仪:配二极管阵列检测器。 5.2 串联质谱仪:配有电喷雾离子源。 5.3 分析天平:感量分别为0.0001g和0.001g。 5.4 超声波清洗器。 5.5 旋转蒸发仪。 5.6 具塞比色管:10mL和25mL。 6 分析步骤 6.1 样品制备 6.1.1 膏霜、香波类样品 称取0.5g样品,精确至0.001g,置于25mL比色管中,用含0.5%甲酸的甲醇溶液(4.9)定容。超 声波提取20min,经滤纸过滤[如有浑浊或乳化现象,加入约0.2g的氯化钠(4.6)],吸取15mL滤液至 100mL蒸发瓶内,并将其接至旋转器上,于45℃水浴中减压蒸馏至干,用3mL含0.5%甲酸的甲醇溶 液(4.9)溶解,过0.45μm滤膜(4.13),滤液供液相色谱仪分析。 6.1.2 水剂类样品 称取1.0g样品,精确至0.001g,置于10mL比色管中,用含0.5%甲酸的甲醇溶液(4.9)定容至刻 度,超声波提取10min,经滤纸过滤,过0.45μm滤膜(4.13),滤液供液相色谱仪分析。 6.2 测定 6.2.1 液相色谱条件 液相色谱测定参考条件如下: a) 色谱柱:SCX色谱柱5μm,250mm×4.6mm(i.d.),或性能相当者; b) 柱温:25℃; c) 检测波长:260nm; d) 进样量:20μL; e) 流动相: 溶剂A:乙腈(4.3),溶剂B:乙酸铵溶液(4.12)。液相色谱梯度洗脱条件见表1。 2GB/T30931—2014 表1 液相色谱梯度洗脱条件 时间/min 乙腈/% 乙酸铵溶液/% 0 100 0 15 80 20 22 80 20 22.1 100 0 6.2.2 标准工作曲线绘制 分别移取20μL浓度为0.00mg/mL、0.01mg/mL、0.05mg/mL、0.10mg/mL、0.50mg/mL、 1.00mg/mL的混合标准工作溶液(4.11.2),按液相色谱条件(6.2.1)进行测定,以色谱峰的峰面积为纵 坐标,对应的溶液浓度为横坐标作图,绘制标准工作曲线。3种苯扎氯铵同系物标准样品色谱图参见 附录B的图B.1。 6.2.3 定量分析 按液相色谱条件(6.2.1)对待测样液进行测定,外标法定量。待测样液中被测物的响应值应在标准 工作曲线的线性范围之内。含量高的样品可取适量样品溶液用含0.5%甲酸的甲醇溶液(4.9)稀释后进 行测定。 6.3 空白试验 除不称取样品外,均按上述测定条件和步骤进行。 7 结果计算 7.1 样品中3种苯扎氯铵含量的计算 样品中3种苯扎氯铵含量按式(1)计算: Xi=ci×V×k m…………………………(1) 式中: Xi———样品中每种苯扎氯铵的含量(即XC12,XC14,XC16),单位为毫克每千克(mg/kg); ci———样品测定液中每种苯扎氯铵的浓度,单位为微克每毫升(μg/mL); V———样品定容体积,单位为毫升(mL); k———乘积因子,对于水剂类化妆品,k=1;对于膏霜、香波类化妆品,k=0.2; m———样品的质量,单位为克(g)。 计算结果应扣除空白值,计算结果保留至小数点后两位。 7.2 样品中3种苯扎氯铵总量的计算 样品中3种苯扎氯铵总量按式(2)计算: X=XC12+XC14+XC16 …………………………(2) 式中: X———样品中3种苯扎氯铵的总含量,单位为毫克每千克(mg/kg); 3GB/T30931—2014 XC12———样品中n-C12H25-C9H13NCl的含量,单位为毫克每千克(mg/kg); XC14———样品中n-C14H29-C9H13NCl的含量,单位为毫克每千克(mg/kg); XC16———样品中n-C16H33-C9H13NCl的含量,单位为毫克每千克(mg/kg)。 计算结果保留到小数点后两位。 8 定性确证 测定过程中如果有阳性结果,应根据保留时间和紫外光谱图初步确证,对于仍有疑问的可采用液相 色谱-质谱法进一步确证。液相色谱-质谱法测定条件参见附录C。 9 检出限和定量限 本方法检出限为30mg/kg,定量限为100mg/kg。 10 回收率与精密度 在添加浓度100mg/kg~1000mg/kg范围内,回收率在95.4%~104.5%之间,相对标准偏差小 于10%。 11 允许差 在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 4GB/T30931—2014 附 录 A (资料性附录) 苯扎氯胺标准样品信息 表A.1 3种苯扎氯铵的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量 序号 中文名称 英文名称 CAS登录号 分子式 相对分子质量 1十二烷基二甲基苄基氯化铵Benzyldimethyldodecylam moniumchloride139-07-1 C21H38ClN 339.99 2十四烷基二甲基苄基氯化铵Benzyldimethyltetradecy lammoniumchloride139-08-2 C23H42ClN 368.05 3十六烷基二甲基苄基氯化铵Benzyldimethylhexadecyl ammoniumchloride122-18-9 C25H46ClN 396.10 图A.1 十二烷基二甲基苄基氯化铵 图A.2 十四烷基二甲基苄基氯化铵 图A.3 十六烷基二甲基苄基氯化铵 5GB/T30931—2014 附 录 B (资料性附录) 标准样品色谱图 说明: 1———C16-BAC(19.01min); 2———C14-BAC(19.34min); 3———C12-BAC(19.76min)。 图B.1 3种苯扎氯铵混合标准样品色谱图 6GB/T