ICS65.020.01 B16 中华人民共和国国家标准 GB/T31788—2015 松球果锈病菌检疫鉴定方法 DetectionandidentificationofCronartiumconigenumHedgcocketHunt 2015-07-03发布 2015-11-27实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国天津出入境检验检疫 局、中华人民共和国福建出入境检验检疫局。 本标准主要起草人:杨翠云、魏亚东、孙娟、沈建国、胡培龙、于翠、阚春月。 ⅠGB/T31788—2015 松球果锈病菌检疫鉴定方法 1 范围 本标准规定了植物中松球果锈病菌(CronartiumconigenumHedgcocketHunt)的检疫鉴定方法。 本标准适用于所有松属(Pinusspp.)、栎属(Quercusspp.)和其他寄主苗木中携带的松球果锈病菌 的检疫鉴定。 2 仪器设备和试验用具 2.1 仪器设备 生物体式显微镜、生物显微镜(具油镜和测微尺)、普通天平(感量0.1g)、超净工作台、高压灭菌器、 冰箱。 2.2 试验用具 斧子、锯子、手持放大镜、手术刀、手术剪、白色磁盘、镊子、载玻片、盖玻片、吸管、酒精灯。 3 现场检疫 3.1 松属植物:主要检查树木主干和分枝是否变形,球果是否受侵后膨大,球果是否在一层非常薄的纸 质的表面下产生大量的锈孢子。锈孢子新鲜时呈明亮的橙色,干燥时呈淡黄色。症状图参见附录A。 松球果锈病菌侵染松属植物引起的症状很易与Cronartiumstrobilinum(Southeasternconerust, orsouthernconerust)引起的症状相混淆,Cronartiumstrobilinum为害症状和其他信息参见附录B和 附录C。 3.2 栎属植物:主要检查树木的叶片边缘底部是否有棕色渐变到黑色的绒状物出现,是病菌的冬孢 子堆。 4 实验室鉴定 4.1 制样 将送检的植物样品通过挑片、切片等方法制成检测样品,在显微镜下直接观察病菌孢子的形态 特征。 4.2 病菌的形态特征 4.2.1 病菌的孢子类型 松球果锈病菌一生可产生5种类型的孢子,侵染松属植物产生性孢子和锈孢子,侵染栎属(Quercus spp.)和栗属(Castaneaspp.)植物产生夏孢子、冬孢子和担孢子。 1GB/T31788—2015 4.2.2 病菌的形态 锈孢子堆过度生长,直径1mm~5mm(平均2.6mm),从上往下观察时,通常分散孤立,呈近圆 形,很少汇合。黏度一致,新鲜时呈明亮的橙色。上层壁像纸一样薄,沿着堆的边缘折裂,呈片状的剥 落,往往留下撕裂状的边缘,由不规则、棍棒状或纺锤形的厚壁细胞组成,(28μm~100μm)× (14μm~32μm),内壁有条纹。锈孢子(19μm~51μm)×(12μm~25μm)(平均35μm×18μm),呈 卵球形或椭圆体,往往形状不规则,壁厚2μm~5μm,粗糙多疣状结节。 夏孢子通常生长在萎黄叶片的背面和表皮下面,分散或者聚集,很少汇合,壁迅速消失。夏孢子伴 有小而透明的棕色侧丝,(16μm~36μm)×(11μm~25μm)(平均25μm×18μm),从卵球形到椭圆 形,大量孢子聚在一起呈现明黄色,壁厚2μm~3.5μm,有1μm高的圆形刺,通常有3个~4个萌 发孔。 冬孢子堆是夏孢子堆的衍生物,冬孢子堆圆柱形,(2.8mm~6mm)×(70μm~150μm),由栗色 变为淡棕色。冬孢子(20μm~50μm)×(10μm~23μm)(平均34μm×16μm),从圆柱形到梭形,淡 棕色,壁厚2μm~6μm,几乎光滑。 担子(32μm~40μm)×(7μm~9μm),从圆柱形到尿囊形,弯曲或者呈钩状,两端圆形,透明,壁 薄,有3个横隔。观察不到担孢子。 松球果锈病菌的形态鉴别特征及形态示意图,参见附录A。 5 结果判定 如果待检样品上病菌为害产生的症状与3.1或者3.2所描述的相符,经过镜检病菌孢子的形态特征 与6.2所描述的相符,则判定样品中检出松球果锈病菌。 6 样品保存与结果记录 6.1 样品保存 将检出松球果锈病菌的植物病材料妥善保存于4℃冰箱中,至少保存12个月,以备复核。保存期 满后,经高温高压灭菌处理。 6.2 结果记录 记录包括:样品来源、种类、取样人员、实验的时间、地点、方法和结果、检验检疫员的签字等。应包 含本标准规定的检测方法所产生的数据及图片:病菌为害症状的图片,病菌各类孢子的形态特征图片和 测量数据。 2GB/T31788—2015 附 录 A (资料性附录) 松球果锈病菌相关资料 A.1 背景资料 A.1.1 病菌基本信息 中文名:松球果锈病菌 学名:CronartiumconigenumHedgcocketHunt 英文名:Southwesternconerust 分类地位:真菌界(Fungi),担子菌门(Basidiomycotina),冬孢菌纲(Teliomycetes),锈菌目(Uredi- nales),柱锈菌科(Cronartiaceae),柱锈菌属(Cronartium)。 传播途径:松球果锈病菌主要以风媒传播。在风力的作用下,锈孢子可传播很长的距离,并可存活 相当长的一段时间。 A.1.2 方法原理 松球果锈病菌转主寄生松属和栎属植物可以产生典型的发病症状;病菌一生可以产生5种类型的 孢子,并具有明显的形态特征。根据松球果锈病菌的寄主范围、症状特点以及病原菌的形态特征,进行 病菌的检疫鉴定。 A.2 分布 松球果锈病菌主要分布在墨西哥(哈利斯科州)、美国(亚利桑那州、新墨西哥州)、伯利兹、哥斯达黎 加、萨尔瓦多、危地马拉、洪都拉斯和尼加拉瓜等。我国未见分布报道。 A.3 寄主范围 松球果锈病菌的锈孢子寄主主要是加勒比松(Pinuscaribaea)、道格拉斯松(P.douglasiana)、湿地 松(P.elliottii)、光叶松(P.leiophylla)、济华华松(P.leiophyllavar.Chihuahuana)、马西姆松 (P.Maximinoi)、米却肯松(P.michoacana)、山松(P.montezumae)、卵果松(P.oocarpa)、展叶松 (P.patula)、拟北美洲乔松(P.pseudostrobus)、野松(P.rudis)和卷叶松(P.teocote)等。 自然状态下,松球果锈病菌的冬孢子寄生主要是栎属(Quercusspp.)中的艾氏栎(Quercus emoryi)、灰橡木(Q.grisea)、Q.hypoleuca和银叶橡树(Q.hyplieucoides)等。 在室温大棚条件下,人工接种则侵染栎属(Quercusspp.)中的海岸栎(Quercusagrifolia)、美国橡 树(Q.alba)、土耳其栎(Q.cerris)、猩红栎(Q.coccinea)、蓝橡树(Q.douglasii)、根柏栎 (Q.gambelii)、强生栎(Q.geminata)、鹅卵石橡树(Q.imbricaria)、大果栎(Q.macrocarpa)、马利兰 德栎(Q.marilandica)、Q.minor、沼生栎(Q.palustris)、栓质栎(Q.phellos)、悬铃树叶栎(Q.pla- tanoides)、矮栎(Q.prinus)、英国栎(Q.robur)、北美红栎(Q.rubra)、黑栎(Q.velutina)和弗吉尼亚栎 (Q.virginiana)。还可侵染栗属(CastaneaMill.)中的C.alnifolia×mollissima、美洲栗 (C.dentata)、板栗(C.mollissima)、矮生板栗(C.pumil),欧洲栗(C.sativa),以及滇栲(Castanopsis 3GB/T31788—2015 diversifolia)、密花石栎(Lithocarpusdensiflora)。 A.4 为害症状 松属植物上的症状:松球果锈病菌侵染松属植物后,球果膨大形成菌瘿。如图A.1所示,感染的球 果体积远远大于没有被感染的,且病球果可膨胀至未感染时的两倍,病果的大小差异较大,木质化不太 严重。病菌的菌丝在感染的球果中完全繁殖,破坏胚珠的发育,导致植物不能生成种子。一般超过一个 以上的季节才可产生锈孢子,继发性损害可能是由昆虫钻入球果引起的。在美国亚利桑那州,锈孢子在 7月和8月之间成熟,而在危地马拉,锈孢子是3月和6月之间成熟,锈孢子在新鲜时呈明亮的橙色,干 燥时呈淡黄色。锈子器产生后菌瘿死亡但会遗留在树上。巨大的菌瘿会压断结果的枝条。在有利天气 引起的爆发期间,球果锈菌可能导致大片松树高达90%的树木受到影响,超过50%的球果死亡。 栎属植物上的症状:栎属植物叶片变成萎黄,在叶片的背面和表皮下面产生明黄色的夏孢子堆,叶 片边缘底部产生棕色渐变到黑色的绒状物,即病菌的冬孢子堆。 A.5 生物学特性 松球果锈病菌是一种转主寄生的真菌病害,以病原体的形式寄生在松属植物和栎属植物上,具有多 重的孢子状态和复杂的生命周期,两年或两年以上完成生活史。在松属植物受到病菌侵染后的膨大球 果内产生大量锈孢子。当球果在第一年生长的时候会被感染,膨胀成各种各样的大小畸形的菌瘿,导致 不能开花结果。被感染2年~3年后,锈孢子器形成。锈孢子器依靠风力传播并感染栎属植物的叶片, 同时夏孢子