ICS71.100.40 Y43 中华人民共和国国家标准 GB/T32122—2015 牙膏中12种硝基咪唑类药物的测定 高效液相色谱法及液相色谱串联质谱法 Determinationof12nitroimidazolesintoothpaste— HPLCandHPLC-MS/MS 2015-10-09发布 2016-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国口腔护理用品标准化技术委员会牙膏分技术委员会(SAC/TC492/SC1)归口。 本标准起草单位:大连市产品质量监督检验所(国家日化产品质量监督检验中心)、大连标准检测技 术研究中心。 本标准主要起草人:毛希琴、郑顺利、任国杰、张国翠、李春玲、顾鑫荣、李鹏、董广斌。 ⅠGB/T32122—2015 引 言 本标准规定的12种硝基咪唑类药物,是我国《口腔清洁护理产品用原料规范》中规定的禁用物质, 不得作为牙膏生产原料即组分添加到牙膏中。如果技术上无法避免上述禁用物质作为杂质带入牙膏 时,则牙膏成品应符合《口腔清洁护理产品用原料规范》要求,即在正常及合理的、可预见的使用条件下, 不得对人体健康产生危害。 目前我国尚未规定这些物质作为杂质存在的限量值。本标准的制定,仅对牙膏中测定这些物质提 供检测方法。 ⅡGB/T32122—2015 牙膏中12种硝基咪唑类药物的测定 高效液相色谱法及液相色谱串联质谱法 1 范围 本标准规定了牙膏中12种硝基咪唑类药物(如表1所示)测定的高效液相色谱法及液相色谱串联 质谱法。 本标准适用于牙膏中上述12种硝基咪唑类药物的测定。 高效液相色谱法方法检出限(对所有目标物):3μg/g,定量下限(对所有目标物):10μg/g;液相色 谱串联质谱法检出限(对所有目标物):0.3μg/g;定量下限(对所有目标物)1μg/g。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6379.1 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第1部分:总则与定义 GB/T6379.2 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第2部分:确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法要点 牙膏用饱和盐水溶液经超声及涡旋处理分散后,用乙腈(含抗氧剂)两次提取目标化合物,合并两次 乙腈提取液并定容后,取部分提取液经氮吹挥干溶剂并用3%甲酸水溶液超声复溶后,过反相和阳离子 混合机理固相萃取小柱,用3%甲酸水溶液淋洗柱床,用2%氨水氨化甲醇(含稳定剂)洗脱目标物,洗脱 液用3%甲酸水溶液中和并定容后,涡旋混匀。用液相色谱法或液相色谱串联质谱法测定,标准曲线外 标法定量。经液相色谱测试,结果为阳性的样品需经液相色谱串联质谱法进行确证。 4 标准物质与试剂 除另有规定外,所用试剂均为分析纯,水为符合GB/T6682的实验室用一级水。 4.1 乙腈:色谱纯(配制色谱流动相使用) 4.2 甲酸:色谱纯(配制色谱流动相使用) 4.3 甲醇 4.4 甲酸 4.5 标准物质的中英文名称、CAS号、分子式、分子结构式及相对分子质量 见表1。 1GB/T32122—2015 表1 标准物质中英文名称、CAS号、分子式、分子结构式、相对分子质量 序号中文 名称英文名称 CAS 分子式 相对分子质量 结构式 14-硝基 咪唑4-nitroimidazole3034-38-6 C3H3N3O2 113.08 22-甲基 -5-硝基 咪唑2-methyl-5- nitroimidazole88054-22-2C4H5N3O2 127.10 3甲硝唑 metronidazole 443-48-1 C6H9N3O3 171.16 4二甲硝 咪唑dimetridazole 551-92-8 C5H7N3O2 141.13 5洛硝哒唑 ronidazole 7681-76-7 C6H8N4O4 200.15 6塞克硝唑 secnidazole 3366-95-8 C7H11N3O3 185.18 76-硝基苯 并咪唑6-nitrobenzimidazole94-52-0 C7H5N3O2 163.14 81-甲基 -5-氯 -4硝基 咪唑1-methyl-5-chloro- 4-nitroimidazole4897-25-0C4H4ClN3O2 161.55 9替硝唑 tinidazole 19387-91-8C8H13N3O4S 247.28 2GB/T32122—2015 表1(续) 序号中文 名称英文名称 CAS 分子式 相对分子质量 结构式 10奥硝唑 ornidazole 16773-42-5C7H10ClN3O3 219.63 11异丙硝唑ipronidazole 14885-29-1C7H11N3O2 169.18 12苯酰甲 硝唑benzoylmetronildazole13182-89-3C13H13N3O4 275.26 4.6 乙腈 4.7 氨水(25%) 4.8 丁基羟基茴香醚(BHA) 4.9 乙二胺四乙酸(EDTA)二钠 4.10 氯化钠 4.11 乙腈(含抗氧剂) 每500mL乙腈添加100mgBHA(4.8)。 4.12 3%甲酸水溶液 15mL甲酸(4.4)加水定容至500mL。 4.13 2%氨水氨化甲醇(含稳定剂) 10mL氨水(4.7)加甲醇(4.3)定容至500mL,加入0.0037gEDTA二钠(4.9)超声溶解。 4.14 3%甲酸水溶液(含稳定剂) 每500mL3%甲酸水溶液(4.12)中添加0.0037gEDTA二钠(4.9),超声溶解。 4.15 饱和盐水溶液 每100mL水中加入约40g的NaCl固体(4.10),充分震荡溶解,容器底部可见不溶的NaCl晶体, 上层溶液即为饱和盐水溶液。 4.16 Strata-X-C固相萃取小柱或相当者:200mg,3mL 使用前,依次用3mL甲醇(4.3)和3mL3%甲酸水(4.12)活化。 3GB/T32122—2015 4.17 标准贮备液(1mg/mL) 准确称取各标准物质10.0mg,用甲醇溶解定容至10.0mL。配置浓度为1mg/mL的标准储备溶 液,于冰箱冷藏保存。保存期3个月。 4.18 标准工作溶液A 临用时将标准储备液(4.17)用甲醇稀释成0.2μg/mL,1μg/mL,5μg/mL,20μg/mL,50μg/mL 系列浓度的标准工作溶液,需现用现配。 4.19 标准工作溶液B 临用时将标准储备液(4.17)用甲醇稀释成10μg/L,20μg/L,50μg/L,100μg/L,200μg/L系列浓 度的标准工作溶液,需现用现配。 5 仪器 5.1 高效液相色谱仪-二极管阵列检测器(高效液相色谱法)。 5.2 高效液相色谱串联四级杆质谱联用仪(ESI源)(高效液相色谱串联质谱法)。 5.3 分析天平:感量0.1mg,0.01mg。 5.4 氮吹仪。 5.5 漩涡混合器。 5.6 超声波清洗器。 5.7 离心机:转速不低于5000r/min,容量10mL。 5.8 移液枪或移液器。 6 试样制备 牙膏样品挤出约2cm,弃去,称取0.2g(精确至0.1mg)牙膏样品于10mL具塞离心管中,加入3mL 饱和盐水溶液(4.15),涡旋并超声15min,至样品完全分散,再向离心管中加入3mL含抗氧剂的乙腈 (4.11),涡旋1min~2min,充分混匀提取,5000r/min离心10min(若分层不理想可适当延长离心时间或 用采用更高转速),将上层乙腈尽量移出并转入10mL刻度试管中。向余下饱和盐水中再加入3mL乙腈 (4.11)重复提取一次。合并两次的乙腈提取溶液,混匀并定容至6mL。移取3mL乙腈提取液于5mL试 管中,氮吹挥干乙腈后向试管中加入3mL3%甲酸水溶液(4.12),涡旋并超声10min,确保瓶内残留物全 部溶解后,将所有溶液转入Strara-X-C固相萃取小柱(4.16),待上样溶液全部流出后,用3mL3%甲酸水 溶液(4.12)淋洗柱床,最后用4mL2%氨水氨化甲醇(含稳定剂)(4.13)洗脱目标物,10mL刻度试管收集 所有洗脱溶液,待所有洗脱溶液流出后,用3%甲酸水溶液(含稳定剂)(4.14),中和洗脱溶液的碱性并定容 至5mL,混匀待测。 7 测定 7.1 液相色谱法 7.1.1 液相色谱条件 液相色谱条件为: 4GB/T32122—2015 a) 色谱柱:poroshell120EC-C18(4.6×100mm,i.d.,2.7μm)或相当者; b)流动相:A水(含0.1%甲酸)、B乙腈(含0.1%甲酸); c)流速:1.0mL/min;柱温:30℃;进样量:5μL; d)检测波长:320nm(参比波长390nm); e)液相色谱分离条件(见表2)。 表2 液相色谱分离条件 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 0 89 11 6 86 14 10 80 20 14 25 75 14.1 0 100 17 0 100 18 89 11 21 89 11 7.1.2 定性分析 将在相同的液相色谱条件下获得的样品溶液的液相色谱分离谱图与标准物质的液相色谱分离谱图 进行比较,若样品谱