ICS 07.080 A 40 中华人民共和国国家标准 GB/T35535—2017 大豆、油菜中外源基因成分的测定 膜芯片法 Detection of genetically modified components in soybean and canola- Membrane-based gene-chip method 2018-07-01实施 2017-12-29 发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T35535—2017 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草 本标准由全国生化检测标准化技术委员会（SAC/TC387)提出并归口。 本标准起草单位：国家农业标准化监测与研究中心（黑龙江）、四川华汉三创生物科技有限公司、安 徽省食品药品检验研究院、上海泽衡生物科技有限公司。 本标准主要起草人：彭丽萍、黄广平、姜雯、陈潇、王志强、曾莲、孔鲁裔、周均、郭尚、王海宽、谢长江、 徐凤霞、李新利。 GB/T355352017 大豆、油菜中外源基因成分的测定 膜芯片法 1范围 本标准规定了膜芯片法检测天豆、油菜中外源基因成分的防污染措施、抽样与制样、原理、试剂与标 准品、仪器与设备、试验方法和流程、结果判断、确证实验、结果表述 本标准适用于大豆、油菜中外源基因成分的定性检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T19495.1转基因产品检测通用要求和定义 GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求 GB/T19495.3转基因产品检测核酸提取纯化方法 GB/T19495.7转基因产品检测抽样和制样方法 SN/T1204植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法 3缩略语 下列缩略语适用于本文件。 AminolinkerC6：6个碳原子作为连接臂的氨基标记（C6Aminolinker） BAR：草丁膦乙酰转移酶基因（phosphinothricinacetylatransferasegene） BARNASE：来源于解淀粉芽孢杆菌（Bacillusamyloliquefaciens）的编码核糖核酸酶的基因 (Bacillus am ylolique faciens ribonuclease gene) BARSTAR：来源于解淀粉芽孢杆菌（Bacillusamyloliquefaciens）的编码核糖核酸酶抑制物的基 因(inhibitor of Bacillus amylolique faciens ribonuclease gene) CaMV35S-P：来自于花椰菜花叶病毒的35S启动子（35Spromoterfromcauliflowermosaicvirus） CaMV35S-T：来自于花椰菜花叶病毒的35S终止子（35Sterminatorfromcauliflowermosaic virus) CrylAc:苏云金芽孢杆菌杀虫毒蛋白crylA（c）基因［BacillusthuringiensisInsecticidaltoxin crylA(c) gene] dATP：脱氧腺苷三磷酸（deoxyadenosinetriphosphate） dCTP：脱氧胞苷三磷酸（deoxycytidinetriphosphate） dGTP：脱氧鸟苷三磷酸（deoxyguanosinetriphosphate) dTTP：脱氧胸苷三磷酸（deoxythymidinetriphosphate） 1 GB/T35535—2017 dUTP：脱氧尿苷三磷酸（deoxyuridinetriphosphate） EPSPS：5-烯醇丙酮酰-莽草酸-3-磷酸合成酶基因（5-enolpyruvyl-shikimate-3-phosphatesynthase gene) FMV35S-P：玄参花叶病毒35S启动子（35Spromoterfromfigwortmosaicvirus） GAT460l：草甘膦乙酰转移酶基因（glyphosateacetyltransferasegene) GOX：草甘膦麟氧化还原酶基因（glyphosateoxidoreductasegene） Lectin：凝集素基因（lectingene） NC：阴性对照（Negativecontrol) NOS-3'：胭脂碱合成酶基因终止子（terminatorofthenopalinesynthasegene) NPT-Ⅱ：新霉素-3-磷酸转移酶基因（neomycinphosphotransferasegene） PAT：草丁麟乙酰CoA转移酶基因（phosphinothricinacetyltransferasegene) PC:阳性对照(Positive control) PEP：磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因（phosphoenolpyruvatecarboxylasegene） Taq:Thermus Aquaticus DNA聚合酶（Thermus Aquaticus DNA polymerase） UDG酶：尿嘧啶-N-糖基化酶（UracilN-glycocasylase) 4防污染措施 检测过程中防止交叉污染的措施应按照GB/T19495.2的规定执行。 5抽样与制样 应符合GB/T19495.7的相关规定 6原理 待检样品经DNA模板提取和核酸定量，采用多重PCR扩增体系，扩增其中可能含有的转基因大 豆、油菜中常见外源基因特异性扩增序列。PCR扩增产物与固定有目标外源基因特异性探针的膜芯片 进行杂交后，检测结果可以用肉眼直接判断，或用芯片识读仪对杂交芯片进行扫描并判定结果。 7试剂与标准品 7.1总则 除非另有规定，本方法中所用试剂均为分析纯，水应符合GB/T6682三级水的规定。 7.2 2试剂组分 本标准中试剂组分和存放条件参见附录A和7.3～7.5的规定。 7.3引物 大豆PCR反应使用的引物序列应符合表1的规定、油菜PCR反应使用的引物序列应符合表2的 规定。 2