ICS 07.030 A 40 中华人民共和国国家标准 GB/T 32262—2015 用于原子力显微镜检测的脱氧核糖核酸 样品的制备方法 Preparation of deoxyribonucleic acid sample for atomic force microscope measurement 2015-12-10发布 2017-01-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T32262—2015 目 次 前言 引言 范围 1 2 规范性引用文件 3 术语和定义、缩略语 3.1 术语和定义 3.2缩略语 方法概要 实验材料及器材 5 6环境条件 7DNA样品制备操作程序 7.1 云母衬底的修饰 7.2DNA溶液的处理· 7.3DNA在衬底上的固定…. 7.4DNA样品的保存 8DNA样品的检测及评价指标…. 8.1 检测 8.2评价指标 附录A（资料性附录）样品的检测实例 A.1 原子力显微镜（AFM） A.2 环境要求 A.3 AFM探针 A.4 典型DNA样品的AFM检测 参考文献 GB/T 32262—2015 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国科学院提出。 本标准由全国纳米技术标准化技术委员会（SAC/TC279）归口。 本标准主要起草单位：中国科学院上海应用物理研究所、上海交通大学、纳米技术及应用国家工程 研究中心。 本标准主要起草人：黄一波、胡钧、张益、孙洁林、李宾、李民乾、何丹农 I GB/T32262—2015 引言 脱氧核糖核酸（DNA）是重要的遗传物质，而原子力显微镜（AFM)是高分辨检测和分析DNA的重 要工具。DNA分子呈链状结构，它的直径接近2nm。由于DNA分子自身和分子之间很容易粘连和团 聚，通常情况下，用于AFM实验的DNA分子需要分散固定在平整的衬底上，并且DNA分子与衬底间 需要有良好的结合才能承受清洗液的侵蚀和冲击。因此，需要标准的DNA样品制备方法，以利于 AFM观察和分析。本标准提供一种适合AFM检测分析用的DNA样品制备方法。 本文件的发布机构提请注意，声明符合本文件时，可能涉及到云母衬底的修饰[7.1条具体内容与 专利号为ZL00116715.4[一种用于DNA操纵的云母衬底的制造方法】内容相关的专利的使用。 本文件的发布机构对于该专利的真实性、有效性和范围无任何立场 该专利持有人已向本文件的发布机构保证，他愿意同任何申请人在合理且无歧视的条款和条件下， 就专利授权许可进行谈判。该专利持有人的声明已在本文件的发布机构备案。相关信息可以通过以下 联系方式获得： 专利持有人姓名：胡钧、黄一波、张益、欧阳振乾、李民乾 地址：上海市嘉定区嘉罗公路2019号 请注意除上述专利外，本文件的某些内容仍可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专 利的责任。 I GB/T32262—2015 用于原子力显微镜检测的脱氧核糖核酸 样品的制备方法 1范围 材、环境条件、云母衬底的修饰、DNA溶液的处理、DNA在衬底上的固定、DNA样品的保存、DNA样品 的评价等。 本标准适用于制备利用AFM研究单个DNA分子的高分辨成像和纳米操纵实验的、吸附在原子级 平整的云母衬底上的各种DNA样品，以及研究其物化性质和生物学功能等。与DNA分子结构相类似 的生物材料的固定也可参照本标准。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 GB/T6682一2008分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义、缩略语 下列术语和定义、缩略语适用于本文件。 3.1术语和定义 3.1.1 原子级平整 atomicallyflat 原子级属于微观结构，材料表面达到原子级水平的平整度。 3.2 2缩略语 AFM：原子力显微镜（AtomicForceMicroscope） DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid) TE：三羟甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸二钠（TRIS-Ethylenediaminetetraaceticacid，disodiumSalt） APTES：（3-氨基丙基）-三乙氧基硅氧烷［（3-aminopropyl）triethoxysilane」 4方法概要 4.1根据AFM的工作原理。在进行样品观测时，应先将要探测的物质放置在一个衬底表面。 4.2由于DNA分子非常小，所以要求将其放置在原子级平整且没有污染的衬底上。 4.3本标准中利用DNA分子在水溶液中表面带负电荷的特性，对新解理的云母衬底进行修饰使其携 带正电荷，从而使得DNA通过静电相互作用牢固地吸附在云母衬底表面，以适合于后续的AFM检测 和分析研究。 1